Thermo Scientific Reagents, Solvents and Accessories

Význam tématu

Derivatizace a příprava vzorků jsou zásadní kroky v chromatografické analýze složitých matric. Díky chemickému přeměnám lze zvýšit detekovatelnost, zlepšit rozlišení a stabilitu analytů vhodných pro GC, GC/MS i HPLC techniky. Správný výběr derivatizačních činidel, refrakčních pufrů či iontových párů a použití vysoce čistých rozpouštědel minimalizuje interferenci a zaručuje reprodukovatelné výsledky v průmyslové i výzkumné praxi.

Cíle a přehled textu

Cílem dokumentu je poskytnout komplexní přehled širokého spektra reagentů, rozpouštědel a pomůcek Thermo Scientific pro GC, HPLC, GC/MS a rychlé přípravné techniky. Kapitoly pokrývají:

• Derivatizační činidla pro specifické funkční skupiny (silylace, acylace, alkylace)
• Reagenty pro GC a GC/MS aplikace
• Iontové páry a pre-/post-column detekční činidla v HPLC
• Amino­kyselinová analýza včetně hydrolyz
• Přípravné pomůcky: Evaporace, suché bloky, SPE, mikroreakční lahvičky

Použitá metodika a instrumentace

Text popisuje chemické protokoly derivatizace: silylací (BSTFA, MSTFA, MTBSTFA, TMSI), acylací (TFAA, MBTFA, PFAA, HFBI), alkylací (BF3-MeOH, PFBBr, TMPAH), a přípravu iontových párů a pre-/post-column činidel pro HPLC. Dále jsou uvedeny postupy pro hydrolytické uvolnění amino­kyselin a SPE extrakce. Instrumentace zahrnuje:

• Gas chromatografii s FID a ECD detektory
• GC/MS pro hmotnostní fragmentaci derivátů
• Reverzní fázi HPLC s UV, fluorescenční a elektrochemickou detekcí
• SPE kartridže pro rychlé čištění vzorků
• Sušící moduly Reacti-Therm a vypařovače Reacti-Vap pro manipulaci se vzorky

Hlavní výsledky a diskuse

Kompendium nabízí optimalizovaná derivatizační činidla s vysokou čistotou a spolehlivou reaktivitou, která:

• Umožňují přípravu tepelně stabilních a detektovatelných derivátů
• Odstraňují interferenci původních funkčních skupin
• Zvyšují citlivost detekce až na nanogramová či pikomolová množství
• Minimalizují vedlejší produkty díky vhodným katalyzátorům (TMCS, TBDMCS)

Pro HPLC derivatizaci a detekci aminokyselin dokument popisuje použití ninhydrinu, o-ftalaldehydu, Marfeyova činidla, dabsyl chloridu a fenylizotiokyanátu. Popisuje se rovněž volba vysoce čistých pufrů a rozpouštědel bez UV absorpce.

Přínosy a praktické využití metody

Vybrané derivatizační i přípravné protokoly přinášejí v praxi:

• Možnost analýzy nelétavých, polárních a termolabilních látek
• Oddělení a kvantifikaci konformačních i optických izomerů aminokyselin
• Rychlou přípravu vzorků bez kontaminace a ztrát analytů
• Jednoduchou integraci do automatizovaných systémů GC a HPLC

Budoucí trendy a možnosti využití

Další vývoj se zaměří na:

• Nová bifunkční a multisite derivatizační činidla pro komplexní matricové vzorky
• Online derivatizaci v kapilárních a mikrofluidních systémech
• Kompatibilitu s vysoce výkonnou hmotnostní spektrometrií
• Integrované moduly pro plně automatizovanou přípravu a výpar vzorků

Závěr

Thermo Scientific nabízí ucelenou řadu chemických reagentů, rozpouštědel, pufrů, standardů a laboratorních pomůcek pro GC, GC/MS, HPLC a přípravné techniky. Jejich vysoká čistota, kvalita balení a osvědčené protokoly zaručují reprodukovatelné výsledky, zvýšenou citlivost a bezproblémový chod analytických procesů ve výzkumu i průmyslu.

Reference

1. Martin, A.J.P. a Synge, R.L.M. (1941). Biochem. J. 35, 1358.
2. Stein, W.H. a Moore, S. (1949). Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 14, 179.
3. Spackman, D.H., Stein, W.H. a Moore, S. (1958). Anal. Chem. 30, 1190.
4. Kirschenbaum, D.M. (1965). Anal. Biochem. 12, 189.
5. Knapp, D.R. (1979). Handbook of Analytical Derivatization Reactions, Wiley.
6. Pierce, A.E. (1968). Silylation of Organic Compounds, Pierce Chemical.
7. McCaldin, D.J. (1960). Chem. Rev. 60, 39.
8. Guo, D. et al. (1985). Peptide retention prediction, 9th APS, Pierce.
9. Lindroth, P. a Mopper, K. (1979). Anal. Chem. 51, 1667.
10. Heinrikson, R.L. a Meredith, S.C. (1984). Anal. Biochem. 136, 65.