Extraction of Opiates from Whole Blood Using ISOLUTE® SLE+ Prior to GC/MS Analysis

Význam tématu

Analýza opiátů v krvi je klíčová pro toxikologii, forenzní a klinické aplikace. Rychlá a spolehlivá extrakce z biologických vzorků zajišťuje přesné kvantifikace a minimální matriční interferenci.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem protokolu je vyvinout a validovat jednoduchou metodu extrakce opiátů z plné krve pomocí ISOLUTE SLE+ kolonek před GC/MS analýzou. Metoda umožňuje simultánní izolaci různých tříd drog (amphetaminy, barbituráty, benzodiazepiny, kokain).

Použitá metodika a instrumentace

• Pre-analytická úprava: k 1 mL krve se přidá 10 µl interního standardu (100 ng/mL), ekvilibrace, následně 1 mL 1% NH4OH a vortex.
• Extrakce: vzorek (750 µL) se aplikuje na ISOLUTE SLE+ 1 mL kolonu, absorpce 5 min. Eluce 2×2,5 mL dichlormetanu (DCM) při gravitaci, alternativně MTBE.
• Post eluce: výpar v proudu vzduchu/N₂, rekonstituce v 250 µL ethylacetátu, derivatizace 40 µL BSTFA+1% t-BDMCS, 30 min/70 °C.

Použitá instrumentace

• GC: Agilent 7890A, kolona DB-5 (30 m×0,25 mm×0,25 µm), helium 1,2 mL/min, inlet 250 °C splitless.
• MS: Agilent 5975C, ionizační zdroj 230 °C, kvadrupól 150 °C, režim SIM s detekcí charakteristických iontů.

Hlavní výsledky a diskuse

• Obnovení analyzátů >85 %, RSD <10 % (DCM i MTBE).
• Lineární rozsah 10–500 ng/mL, koeficient determinace r² 0,9967–0,9998.
• Hraniční kvantitace (LLOQ) mezi 50–100 ng/mL v závislosti na analyzátu.

Přínosy a praktické využití metody

• Jednoduchá a rychlá příprava bez vylučování proteinů.
• Vyšší čistota extraktů, minimalizace emulzí.
• Vhodné pro rutinní toxikologii a forenzní laboratoře.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Automatizace SLE+ formátů pro vyšší throughput.
• Rozšíření na nové třídy analýz a menší objemy (microextraction).
• Integrace s vysokoúčinnými MS systémy pro citlivější detekci.

Závěr

Metoda SLE+ poskytuje rychlou, reprodukovatelnou a vysoce účinnou extrakci opiátů z krve s minimální matriční interferencí, vhodnou pro GC/MS analýzu v toxikologii.

Reference

• Biotage. Application Note AN852: Extraction of Opiates from Whole Blood Using ISOLUTE SLE+ Prior to GC/MS Analysis. 2015.