Analysis of Amino Acids as tert.-Buthyldimethylsilyl Derivatives

Význam tématu

Analýza aminokyselin jako tert butyldimethylsilyl derivátů poskytuje zvýšenou teplotní stabilitu a detekční citlivost při plynové chromatografii s hmotnostní spektrometrií a nachází uplatnění v biochemii a klinické diagnostice.

Cíle a přehled studie

Úkolem bylo vyvinout a optimalizovat robustní metodiku pro separaci a identifikaci 25 proteogenních aminokyselin a jejich vybraných metabolitů po derivatizaci MTBSTFA do kapilární kolony InertCap 5MS NP.

Použitá metodika a instrumentace

Derivatizace:

• Reakce aminokyselin s MTBSTFA v acetonitrilu za vzniku TBDMS derivátů

Chromatografické podmínky:

• Kolona InertCap 5MS NP 0.25 mm ID x 30 m df 0.25 μm
• Teplotní program 150 °C po dobu 2 min, poté 10 °C/min do 300 °C, hold 3 min
• Dopravní plyn helium při rychlosti 40 cm/s
• Injekce split 1:20, teplota portu 280 °C

Detekce:

• MS scan v rozsahu m/z 45 až 800, interface 280 °C
• Vzorková velikost 1 μl roztoku 50 mg/l

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda umožnila spolehlivé oddělení 25 aminokyselin včetně hydroxyprolinu, ornitinu a cystinu do 20 minut. Chromatogram ukázal ostré píky s vynikajícím rozlišením a reprodukovatelností retencí lepší než 0.1 procenta.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda nabízí vysokou citlivost na nízké hladiny aminokyselin, široký lineární rozsah a vysokou robustnost. Vhodná pro nutriční analýzy, metabolomiku, klinickou diagnostiku i kontrolu kvality potravin.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se využití tandemové hmotnostní spektrometrie pro zvýšení selektivity, automatizace derivatizace pro vyšší throughput a rozšíření aplikací v proteomice a komplexních biologických matricích.

Závěr

Validovaná metoda GC MS po derivatizaci TBDMS poskytuje vysokou reprodukovatelnost, selektivitu a citlivost a je široce použitelná v oblasti analytické chemie.

Reference

1. Christopher J Biermann et al J Chromatography 357 330 334 1986
2. Thomas P Mawhinney et al J Chromatography 358 231 242 1986
3. SL MacKenzie et al J Chromatography 387 241 253 1987
4. HJ Chaves Das Neves et al J Chromatography 392 249 258 1987