Quantitation of 5 NSA in Metformin API as per proposed USP General Chapter <1469> Procedure-4 by GC-MS/MS

Význam tématu

Výskyt nitrosaminů v léčivých přípravcích představuje významné riziko kvůli jejich mutagenním a karcinogenním vlastnostem. Regulace jejich obsahu v API a FDF je klíčová pro bezpečnost pacientů, jak zdůrazňuje USP <1469>.

Cíle a přehled studie

Tato studie si klade za cíl navrhnout a ověřit metodu GC-MS/MS pro kvantifikaci pěti nitrosaminů (NDMA, NDEA, NEIPA, NDIPA, NDBA) v Metformin API podle postupu 4 navrženého v USP <1469> s využitím systému Shimadzu GCMS-TQ 8050 NX a autosampleru AOC-20i Plus.

Použitá instrumentace

• Gas Chromatograph Mass Spectrometer GCMS-TQ 8050 NX
• AOC-20i Plus autosampler
• Kolona Wax MS (30 m × 0,25 mm I.D., 1,0 μm df)
• Ionizační režim Electron Ionization (EI), CID plyn Argon

Použitá metodika

Vzorky Metformin API (500 mg) byly extrahovány v dichlormethanu, centrifugovány a filtrovány filtrem 0,45 μm. Analýza proběhla injekcí splitless (2 μL), tok helia 1,0 mL/min a tepelným programem od 40 °C do 230 °C. Pro detekci byly optimalizovány MRM přechody a kolizní energie pro každý analyte; interním standardem byl NDMA C13-d6. Kalibrace probíhala v rozsahu 0,25–15,0 ppb (8bodová křivka). LOD a LOQ byly stanoveny na 0,1 ppb a 0,25 ppb.

Hlavní výsledky a diskuse

• Koeficienty determinace r² > 0,995 pro všechny analyty potvrzují lineární odezvu.
• Opakovatelnost při LOQ (n=6) vykázala %RSD < 10 %.
• Limit detekce 0,1 ppb a kvantifikační limit 0,25 ppb umožňují detekci stopových úrovní.
• Recovery při LOQ úrovni dosahovaly 71–110 % (u NDBA 71 %, u ostatních přes 95 %).
• Metoda nabízí nižší LOQ než doporučení USP (např. NEIPA: 2,5 vs. 5,0 ppb).

Přínosy a praktické využití metody

Metoda umožňuje spolehlivou a rutinní kontrolu stopových nitrosaminů v Metforminu API. Splňuje požadavky USP <1469> a podporuje QA/QC procesy ve farmaceutickém průmyslu díky vysoké citlivosti, přesnosti a reprodukovatelnosti.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření aplikace na další léčivé zdroje (API i FDF), integrace s vysokorychlostními GC-MS systémy a automatizovanými přípravami vzorků. Vývoj nových kolon a pokročilých ionizačních technik může dále zvýšit citlivost a selektivitu analýzy.

Závěr

Navržená GC-MS/MS metoda na systému Shimadzu GCMS-TQ 8050 NX s AOC-20i Plus prokázala rychlou, citlivou a reprodukovatelnou detekci pěti nitrosaminů v Metforminu API. Výsledky potvrzují vhodnost postupu 4 z USP <1469> a poskytují vylepšené LOQ pro klíčové analyty.

Reference

• United States Pharmacopeia. General Chapter <1469> Assessment and Control of Nitrosamines in Pharmaceuticals.
• Suryawanshi N., Handique D., Hase P., Chiplunkar S., Sawant D., Wagle A., Dwivedi R., Kelkar J., Rasam P. Quantitation of 5 Nitrosamines in Metformin API by GC-MS/MS. Shimadzu Analytical (India) Pvt. Ltd., Application Note 06-SAIP-GC-028-EN, September 2021.