Comparing glass and deactivated stainless steel sample cups - Part 2 Analysis of fatty acids in Salmonella by reactive Py-GC/MS

Význam tématu

Analýza mastných kyselin v mikrobiálních vzorcích poskytuje klíčové informace o biochemickém složení buněčných membrán a metabolických drahách. Metoda reaktivní pyrolyzační GC/MS s methylací pomocí TMAH umožňuje přímé stanovení lyofilizovaných bakteriálních buněk bez nutnosti rozsáhlé předúpravy. Srovnání materiálů misek je důležité pro zajištění reprodukovatelnosti a spolehlivosti výsledků v praxi.

Cíle a přehled studie / článku

Studie se zaměřuje na porovnání dvou typů misek pro vzorky (skleněné Eco-cup G a pasivované nerezové Eco-cup) při analýze mastných kyselin v kmeni Salmonella typhimurium LT2 pomocí reaktivního pyrolytického methylování (RxPy) následného GC/MS. Cílem je ověřit, zda materiál misky ovlivňuje chromatografický profil a kvantitativní složení derivátů mastných kyselin.

Použitá metodika a instrumentace

• Vzorkování: 30 μg lyofilizovaných buněk Salmonella typhimurium LT2 smíchaných s 6 μL 25 % roztoku tetramethylamoniového hydroxidu (TMAH) v methanolu
• Pyrolyzér: Multi-Shot Pyrolyzer EGA/PY-3030D s pevnou teplotou 400 °C
• GC/MS: splitové vstřikování, kolona UA-CW (30 m, 0,25 mm i.d., 0,25 μm film)
• Teplotní program pece GC: 50 °C–180 °C (5 °C/min, držení 20 min), poté 220 °C (5 °C/min)

Hlavní výsledky a diskuse

Chromatogramy derivátů mastných kyselin získané ze skleněné i nerezové misky vykazují téměř identické profilace. Kvantitativní složení podle relativních ploch píků ukazuje shodu v zastoupení hlavních mastných kyselin (C12:0, C14:0, C16:0, C16:1, C17:0, cyklo C17, C18:0, C18:1) v rozsahu rozdílů do 3 mol %. Minimalita rozdílů potvrzuje, že typ povrchu misky nevstupuje do reakce ani neovlivňuje účinnost methylace.

Přínosy a praktické využití metody

Reaktivní pyrolytická GC/MS umožňuje rychlé a přímé stanovení složení mastných kyselin v biologických vzorcích bez složitého vzorkovacího protokolu. Možnost používat různé materiály misek bez ovlivnění výsledků zvyšuje flexibilitu laboratoří a snižuje riziko kontaminace.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření metody na další typy biologických vzorků (rostlinné nebo živočišné tkáně)
• Optimalizace reaktivních činidel pro zdokonalení derivatizace
• Integrace s automatizovanými systémy pro vysokoprůtokové analýzy
• Využití v metagenomice a mikrobiálních komunitách k rychlému sledování lipidových profilů

Závěr

Výsledky potvrzují, že při reaktivní pyrolyticko–GC/MS analýze mastných kyselin Salmonella typhimurium lze použít jak skleněné, tak deaktivované nerezové misky se srovnatelnou přesností a reprodukovatelností. Metoda je robustní a vhodná pro rutinní i výzkumné aplikace v oblasti mikrobiologie a biochemie.

Reference

• Y. Ishida et al., Journal of Analytical and Applied Pyrolysis, 77 (2006) 116-120