Všechny mé analyty jsou neutrální, ale kontaminanty jsou kyselé nebo bazické (aminy). Jaký je nejlepší způsob, jak zakoncentrovat a vyčistit analyty mého zájmu?

Vítejte u našeho nového technického tipu pro přípravu vzorků. Tento měsíc se podíváme na to, jak extrahovat neutrální analytické látky s ionizovanými interferencemi.

Při extrakci neutrálních analytických látek z vodné vzorkové matrice (moč, plazma atd.) je snadné sáhnout po reverzní fázi (C18, polymer SDBV atd.).

Analyty jsou zadržovány na řetězcích C18 prostřednictvím van der Waalsových interakcí. Polární interference, jako jsou soli, lze z kolony vymýt vodou; méně polární interference lze odstranit pomocí malého procenta methanolu (obvykle kolem 10 %), opět ve vodě. Analyty se obvykle eluují pomocí 100% methanolu.

V některých případech může vzorek obsahovat kyselé nebo zásadité nečistoty, které mají relativně vysokou hydrofobitu. Takové interference zůstanou zachyceny při plnění, nemusí být odstraněny během promývání a pravděpodobně budou eluovány společně s analyzovanými látkami. Mohou být také eluovány v podobné eluční oblasti jako analyzované látky, což může způsobit problémy se specificitou metody.

Phenomenex: Všechny mé analyty jsou neutrální, ale kontaminanty jsou kyselé nebo bazické (aminy). Jaký je nejlepší způsob, jak zakoncentrovat a vyčistit analyty mého zájmu?

Pokud místo kartuše s „výhradně reverzní fází“ použijete smíšený (mixed-mode) sorbent, je možné během SPE postupu odstranit nabité interference. Pokud uvažujeme o neutrálních sloučeninách v přítomnosti hydrofobní báze, prvním krokem by bylo okyselení vzorku, aby se zajistilo protonování zásadité sloučeniny. Toho lze dosáhnout přidáním silné kyseliny, jako je kyselina chlorovodíková (HCl).

Vzorek s upraveným pH lze poté nanést na kondicionovanou a ekvilibrovanou kartuši, jako je Strata™-X-C, zobrazená výše. Zásaditá interference bude zadržena elektrostatickými (Coulombickými) interakcemi na skupině kyseliny sulfonové zobrazené červeně; analyty zájmu budou zadrženy van der Waalsovými interakcemi (jak je vidět u extrakce na čistě reverní fázi) prostřednictvím interakcí se zbytkem polymerního materiálu zobrazeného černě.

Promývací kroky by také měly obsahovat kyselinu, například zředěnou HCl, aby se udrželo nízké pH. V tomto případě bychom promývali 0,1 M HCl, abychom odstranili polární látky, a 0,1 M HCl v 10% methanolu, abychom odstranili více hydrofobních nečistot. Konečná eluce by pak proběhla v methanolu. Hydrofobní zásaditá sloučenina zůstane během elučního kroku uvnitř kartuše.

Podobný přístup s použitím Strata-X-A lze použít, pokud je žádoucí odstranění kyselých sloučenin. V tomto případě bychom však místo zředěné HCl použili pufr s pH kolem 8 pro úpravu vzorku a pro použití během promývacích kroků.

Phenomenex: Všechny mé analyty jsou neutrální, ale kontaminanty jsou kyselé nebo bazické (aminy). Jaký je nejlepší způsob, jak zakoncentrovat a vyčistit analyty mého zájmu?

Doufáme, že vám tento tip byl užitečný! Podívejte se na naše zdroje týkající se extrakce v pevné fázi. Uvidíme se příští měsíc s dalším tipem!