Když budete správně rozumět tomu, co je příčinou problému, bude snazší postupovat dále logicky a problém správně vyřešit.
Připravili jsme pro Vás stručný popis důvodů a možných řešení a postupů s následným přehledem detailních příruček a prezentací k troubleshootingu, neboli řešení problémů Vašich plynových chromatografů a hmotnostních spektrometrů. 
Nalezení příčiny a pochopení problému Vám také umožní změnit Váš přístup k analýze nebo údržbě, abyste se v budoucnu problémům předem vyhnuli. Správné používání Vašeho plynového chromatografu nebo hmotnostního spektrometru a jeho pravidelná údržba je obvykle z pohledu nákladů tím nejefektivnějším řešením! 
Mezi až překvapivé množství běžných problémů patří poměrně jednoduché a často přehlížené základní komponenty GC systému, spotřební materiál nebo nastavení parametrů analýzy.
Mnoho těchto věci je každodenní rutinou a pracujeme s nimi stylem „nastavit a zapomenout“. Patří mezi ně například:
<ul>
<li>Plyny: tlaky, průtoky nosného plynu nebo pracovních plynů detektorů, splitu a oplachu septa
</li>
<li>Teploty: Kolony, injektoru, detektoru a všech vyhřívaných propojení
</li>
<li>Parametry GC nebo GC/MS systému: proplachy, parametry detektorů, rozsahy hmotnost u MS a pod.
</li>
<li>Přívodní a spojovací kapiláry a trapy: čistota, netěsnosti, nasycení a expirace
</li>
<li>Spotřební materiál pro injektor: septa, linery, O-kroužky a ferrule
</li>
<li>Integrita vzorku: koncentrace, degradace, rozpouštědlo a skladování
</li>
<li>Stříkačky: technika používání, netěsnosti, tvar jehly a čistota
</li>
<li>Systém sběru dat: nastavení a připojení
</li>
</ul>
<blockquote>
Článek: <a href="https://gcms.cz/article/854">TEORIE, PRAXE A ÚDRŽBA: GC – Plynová chromatografie – základy a principy</a>
</blockquote>
<blockquote>
Článek: <a href="https://gcms.cz/article/3474">Organická analýza - Principy plynové chromatografie</a>
</blockquote>
<blockquote>
Článek: <a href="https://gcms.cz/article/3471">Organická analýza - Techniky plynové chromatografie</a>
</blockquote>
<h3>Základní nástroje pro řešení problémů:</h3>
Vždy mějte k dispozici manuál k Vašemu přístroji, dostupných je v dnešní době mnoho výukových a názorných videí a nejmodernější systémy disponují také celou řadou auto-diagnostických „SMART neboli INTELIGENTNÍCH“ funkcí.
<h5>Mezi základní diagnostické nástroje ale patří:</h5>
<ul>
<li>Průtokoměr s rozsahem 10 až 500 ml/minutu</li>
<li>Nové stříkačky</li>
<li>Standardní látka, která se na koloně nezdržuje a je dobře detekovatelná, jako je methan nebo propan</li>
<li>Septa, Ferrule, Linery a další spotřební materiál</li>
<li>Elektronický detektor netěsností</li>
<li>Referenční vzorek</li>
<li>Referenční kolonu s ověřenou a známou funkčností</li>
</ul>
<h3>Odstraňování problémů pak začíná izolováním problému</h3>
<h5>Běžně existuje 5 základních oblastí, ve kterých problém vzniká:</h5>
<ul>
<li>INJEKTOR</li>
<li>PRŮTOK</li>
<li>KOLONA</li>
<li>DETEKTOR</li>
<li>ELEKTRONIKA</li>
</ul>
Bohužel běžně je to také jejich různá kombinace...
<h3>Vše fungovalo a najednou se něco stalo...</h3>
Z logiky vyplývá, že se něco muselo změnit, ať již pomalu postupem času nebo nějakou provedenou operací. Vždy je něco jinak.
<h5>Prozkoumejte historii předchozích událostí - log book, laboratorní deník a pod...:</h5>
<ul>
<li>Vyměnili jste kolonu, liner, septum, stříkačku a pod...?
</li>
<li>Nastříkli jste nějaký vzorek, použili jinou metodu, a pod....?
</li>
<li>Provedli jste nějakou údržbu, zkrátili kolonu, propláchli inlet a pod....?
</li>
</ul>
<h3>Typické problémy a důvody jsou:</h3>
<ul>
<li>Chvostování píků - cesty v kontaktu se vzorkem nebo aktivita materiálu
</li>
<li>Extra píky - ve vzorku nebo zpětném proplachu (přenos vzorku - carry over)
</li>
<li>Štěpení píků - Problémy s injektorem, Směsné rozpouštědlo
</li>
<li>Žádné píky - nebyly nastříknuty nebo nebyly detekovány
</li>
<li>Změny odezvy - aktivita, diskriminace nástřiku, problém detektoru
</li>
<li>Frontování píků - vysoká koncentrace nebo špatná rozpustnost, problémy s injektorem
</li>
<li>Posuny retenčních časů - netěsnosti, stárnutí kolon, kontaminace nebo poškození
</li>
<li>Ztráta rozlišení - pokles separace, rozmývání píků
</li>
<li>Problémy s baseline - krvácení z kolony, kontaminace, elektronika
</li>
<li>Šum baseline - elektronika nebo kontaminovaný detektor
</li>
<li>Problémy s kvantifikací - problémy s aktivitou, injektorem nebo detektorem
</li>
</ul>
<h3>Přehled podrobných příruček, přednášek, technických článků a dalších dokumentů <a href="https://gcms.cz/library?search=troubleshooting&amp;publicationTypeItems=7-5-4-2-3">ke stažení v knihovně LabRulez</a>:</h3>
<ul>
<li>GC Troubleshooting Guide | 2019 | Agilent Technologies
</li>
<li>Troubleshooting GC Capillary Columns | 2011 | Agilent Technologies
</li>
<li>Trap Selection, Fast GC, and Troubleshooting Strategy for Purge &amp; Trap GC Volatiles | 2014 | Merck
</li>
<li>Practical Steps in GC Troubleshooting | 2017 | Agilent Technologies
</li>
<li>Solid Phase Microextraction Troubleshooting Guide | 2004 | Merck
</li>
<li>GC Troubleshooting Series: Column Installation | 2009 | Agilent Technologies
</li>
<li>GC Troubleshooting Series: Leak Check | 2009 | Agilent Technologies
</li>
<li>Don’t Fear the Ghost or Unexpected Peaks: Troubleshooting and Prevention | 2019 | Agilent Technologies
</li>
<li>Troubleshooting Problems When Lighting an FID | 2003 | Phenomenex
</li>
<li>Troubleshooting Where it Starts – Sample Handling | 2017 | Thermo Fischer Scientific
</li>
<li>GC Troubleshooting Series: Replace Gold Seal | 2009 | Agilent Technologies
</li>
<li>Practical Steps in GC Troubleshooting Techniques, Tips, and Tricks | 2017 | Agilent Technologies
</li>
<li>Seminar GC Troubleshooting | 2014 | Merck
</li>
<li>GC TROUBLESHOOTING GUIDE | 2017 | Phenomenex
</li>
<li>GC &amp; GC/MS Troubleshooting Quick Reference Guide | 2021 | ChromSolutions
</li>
<li>Troubleshooting 6890/6850 Split/Spitless Inlet Leaks - Cannot achieve Setpoint Pressure | N/A | Agilent Technologies
</li>
<li>GC Troubleshooting - Demo: Replace Liner, Septum, O-Ring | 2009 | Agilent Technologies
</li>
<li>GC Troubleshooting Series Part Two: Baseline Disturbances | 2009 | Agilent Technologies
</li>
<li>GC Troubleshooting Series Part One: Ghost Peaks | 2009 | Agilent Technologies
</li>
<li>It’s Peak Season for Great Peak Shape - Tips and tricks on troubleshooting in GC chromatography | 2020 | Agilent Technologies
</li>
</ul>

Řešení problémů v plynové chromatografii (GC & GC/MS Troubleshooting)

<a href="https://gcms.cz/article/972">V první části příspěvku o chvostování píků</a> jsme si řekli trošku teorie a podívali se, kdy dochází k tomuto jevu a co je jeho příčinou. V závěru jsme otevřeli téma turbulentního proudění kolonou, které je způsobeno primárně chybnou instalací GC kolony jako její seříznutí, správná délka v části injektoru a detektoru nebo těsnost tohoto spoje.
Turbulentní proudění průtoku vzorku kolonou můžeme nechtěně způsobit i nešikovným seříznutím kolony. Vliv na povahu proudění mají dále netěsnosti systému stejně jako obstrukce neboli překážky v proudění mobilní fáze. Příkladem obstrukci působících nečistot mohou být odštěpky septa, které se s rostoucím počtem nástřiků zákonitě dostávají do systému, nánosy netěkavých sloučenin ve skelné vatě lineru a podobně. 
Metaforicky lze nežádoucí jev turbulentního proudění přirovnat k vlivu kamene umístěného v rovnoměrném proudu vody horské říčky. Bezprostředně za kamenem vzniká turbulentní zpětný protiproud. Podobně bude pozměněn průtok nosného plynu a vzorku bezprostředně za jakoukoliv mechanickou nečistotou v GC koloně.
Někdy mohou být chvostující píky způsobeny nežádoucími polárními interakcemi mezi rozpouštědlem, rozpuštěnými látkami a stacionární fází kolony. Vždy pamatujte, že vodná rozpouštědla se nemísí s lipofilními látkami a naopak. Pokud je tedy pro vás problémem najít pro vzorek vhodné, v tomto směru optimální rozpouštědlo, pravděpodobně na následném chromatogramu uvidíte chvostující píky. Použité rozpouštědlo, vzorek i stacionární fáze kolony by si měly být látky blízké povahou své rozpustnosti ve vodě či v tucích. Chvostování píků bývá často projevem nesourodosti metody ve vlastnostech těchto látek. Optimalizovat shodu můžeme pochopitelně pouze změnou kolony a její stacionární fáze, nebo změnou rozpouštědla. Většina analytiků pak v tento moment raději strpí pokřivené píky, než aby zasahovali do parametrů metody.
V případě, že pozorujete chvostující nebo zkreslené píky pouze u látek s retenčními časy blízkými rozpouštědlu nebo píku hlavního analytu směsi, jedná se o reverzní efekt rozpouštědla. Látky eluující se v blízkosti rozpouštědla podléhají totiž při separaci nejen afinitě stacionární fáze, ale i afinitě rozpouštědla a jejich setrvávání na stacionární fázi tudíž není dostatečné pro optimální tvar a rozlišení píků. Tento jev si lze představit i jako jakousi soutěž mezi stacionární fázi a rozpouštědlem o vazbu s daným analytem. Ideální prevencí reverzního efektu rozpouštědla je použití 3 až 5 metrů dlouhé, deaktivované křemíkové předkolony.
Ve videu výše můžete ve zkrácené délce vidět příklad takové předkolony. Její vliv na eliminaci reverzního efektu rozpouštědla můžete vidět na obrázku.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_hromatogram_vlevo_znazornuje_separaci_na_GC_systemu_bez_zapojeni_predkolony_retencniho_gapu_2_f7ab0c9605/HPST-hromatogram-vlevo-znazornuje-separaci-na-GC-systemu-bez-zapojeni-predkolony-retencniho-gapu-2..png" alt="HPST: Chromatogram vlevo znázorňuje separaci na GC systému bez zapojení předkolony/retenčního gapu. Chromatograf vpravo znázorňuje ten samý nástřik do systému se zařazenou předkolonou. U analytů 1,2 a 3 lze vpravo pozorovat výrazné zlepšení rozlišení a tvaru píků vlivem předkolony."/>
Pokud při splitless či on-column nástřiku pozorujete jev chvostujících píků snižující se se stoupajícím retenčním časem analytů, jedná se o přetrvávající reverzní efekt rozpouštědla. K nápravě tohoto jevu dopomůže snížení teploty kolony na počátku nástřiku, čímž zvýšíte fokusaci rozpouštědla. Obvykle se teplota v této souvislosti snižuje o 10 až 20 °C pod bod varu rozpouštědla. Na obrázku vidíte rozdíl v separaci a tvaru píků při fokusaci hexanu nastavením počáteční teploty kolony na 50 °C (teplota varu hexanu 68-69 °C).
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_Na_obrazku_vidite_rozdil_v_separaci_a_tvaru_piku_pri_fokusaci_hexanu_nastavenim_pocatecni_teploty_kolony_na_50_C_teplota_varu_hexanu_68_69_C_7fa71f9dd7/HPST-Na-obrazku-vidite-rozdil-v-separaci-a-tvaru-piku-pri-fokusaci-hexanu-nastavenim-pocatecni-teploty-kolony-na-50-C-(teplota-varu-hexanu-68-69-C)..jpg" alt="HPST: Vliv teploty nástřiku na fokusaci rozpouštědla v plynové chromatografii."/>
Při počáteční teplotě kolony 70 °C je fokusační efekt zanedbatelný (vlevo), zatímco po snížení teploty na 50 °C dojde k znatelnému zúžení prostoru kondenzace rozpouštědla na počátku kolony – fokusaci, a tím i ke zlepšení tvaru píků ostatních analytů (vpravo).
Při splitovaném nástřiku se snažte docílit minimálního průtoku nosného plynu inletem 20 ml/min, lépe pak alespoň 30 ml/min. Nižší rychlosti proudu nosného plynu budou opět přispívat k chvostování píků, jak ukazuje následující obrázek.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_Vliv_prutoku_nosneho_plynu_pri_Split_nastriku_v_plynove_chromatografii_231433e377/HPST-Vliv-prutoku-nosneho-plynu-pri-Split-nastriku-v-plynove-chromatografii..jpg" alt="HPST: Vliv průtoku nosného plynu při Split nástřiku v plynové chromatografii."/>
Povšimněte si chvostování prvních dvou píků. Splitovací poměr během tohoto nástřiku byl poměrně nízký (5:1) a průtok nosného plynu inletem následně již nebyl dostatečný, aby zajistil potřebně rychlý vstup většího objemu vzorku na kolonu. Zde byl průtok kolonou 1 ml/min. Při splitovacím poměru 5:1 se tak se započtením průtoku oplachu septa (3 ml/min) dostáváme na celkový průtok inletem pouhých 10 ml/min, což je příliš málo pro dostatečně rychlý proces vstupu vzorku na kolonu. 
Část těkavějších analytů tak již začíná procházet kolonou v momentě, kdy jejich úplný objem ještě zcela nestihl vstoupit na stacionární fázi kolony. Píky právě těchto složek následně na chromatogramu chvostují. Méně těkavé složky, později eluující analyty, které se kolonou pohybují pomaleji, tento jev nepostihne, protože mají vyšší bod varu a vstupují na kolonu jednotně i za vyšších počátečních teplot gradientu metody.
Pomoci si v tomto případě můžete zvýšením splitovacího poměru a tím pádem zmenšením objemu vzorku vstupujícího na kolonu. Samozřejmě tak můžete učinit pouze pokud víte, že další zředění vzorku následně neohrozí citlivost detekce analytů nižších koncentrací. Efekt zvýšení splitovacího poměru ukazuje obrázek níže.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_Vliv_zvyseni_splitovaciho_pomeru_pri_nastriku_v_plynove_chromatografii_f75dbf4569/HPST-Vliv-zvyseni-splitovaciho-pomeru-pri-nastriku-v-plynove-chromatografii..jpg" alt="HPST: Vliv zvýšení splitovacího poměru při nástřiku v plynové chromatografii."/>
<h3>Příčiny chvostování píků a jejich řešení:</h3>
<ol>
<li>Znečištění prostoru inletu</li>
</ol>
<ul>
<li>Proveďte základní údržbu inletu. Vyměňte liner, o-těsnění, septum, pokud je třeba, tak i zlaté těsnění.</li>
</ul>
<ol start="2">
<li>Příliš špinavé vzorky</li>
</ol>
<ul>
<li>Zvažte změnu přípravy vzorku, případně začleňte další kroky, například filtraci vzorku, aby se problém neobjevil znovu.</li>
</ul>
<ol start="3">
<li>Zanesení počátku kolony netěkavými látkami, nečistotami</li>
</ol>
<ul>
<li>Seřízněte kolonu. Zkrácení kolony většinou tento problém vyřeší.</li>
</ul>
<ol start="4">
<li>Přítomnost mechanické překážky toku mobilní fáze</li>
</ol>
<ul>
<li>Pakliže nic z předešlého nepomohlo, otestujte kolonu na přítomnost mechanické překážky průtoku nástřikem hexanu nebo butanu. Tyto látky by při plynulém průtoku neměly jevit jakékoliv deformace píků.</li>
</ul>
<ol start="5">
<li>Špatně nainstalovaná kolona</li>
</ol>
<ul>
<li>Uvolněte kolonu z inletu a detektoru a pečlivě ji opětovně připojte znovu zpět.</li>
</ul>
<ol start="6">
<li>Nekompatibilní hydrofilita/lipofilita rozpouštědla, vzorku a stacionární fáze.</li>
</ol>
<ul>
<li>vyzkoušejte jiné rozpouštědlo, jiný typ kolony.</li>
</ul>
<ol start="7">
<li>Chvostují píky vysoce těkavých analytů v blízkosti píku rozpouštědla</li>
</ol>
<ul>
<li>Nainstalujte 3 až 5 metrů dlouhou deaktivovanou křemíkovou předkolonu.</li>
</ul>
<ol start="8">
<li>Při metodě využívající on-column či splitless nástřiku se jev chvostování objevuje u všech analytů a klesá se stoupajícím retenčním časem sloučeniny</li>
</ol>
<ul>
<li>Uvažujte vliv přetrvávajícího reverzního efektu rozpouštědla. Snižte počáteční teplotu metody na 10 - 20 °C pod teplotu bodu varu rozpouštědla.</li>
</ul>
<ol start="9">
<li>Problém se objevuje u těkavých, brzy eluujících analytů během splitovaného nástřiku</li>
</ol>
<ul>
<li>Zkontrolujte, zda nemáte příliš malý splitovací poměr, tudíž na daný průtok inletem příliš velký objem vzorku vstupujícího na kolonu.</li>
</ul>
<h3>Nepřehlédněte</h3>
Přehled videí věnující se údržbě Vašeho GC (instalace GC kolony, výměna lineru, septa, splitovacího trapu a zlatého těsnění) od Agilent Technologies naleznete v článku <a href="https://gcms.cz/article/873">Údržba Vašeho GC - série videí od Agilent Technologies</a>

Údržba Vašeho GC. Chvostující píky (2. část)

Společnost Agilent Technologies vyvinula ve své továrně v Middelburgu v Nizozemí nový typ ferulí. Ferule jsou zkonstruovány z nerezové oceli, která je potažena ultra inertní vrstvou polyimidu pomocí plazmové atmosféry. Tyto ferule jsou mimořádně vhodné pro analýzy aktivních látek. Doplňují portfolio produktů pro tzv. <a href="https://gcms.cz/library?mainauthorItems=10&amp;search=Capillary+Flow+Technology">CFT (Capillary Flow Technology)</a>. Použitím těchto ferulí zajistíte maximální těsnost spojů při instalaci kolony. Nemusíte se obávat destrukce ferule při dotažení matky, k tomu jí dopomáhá její tvar a výběr materiálu. Další výhodou je její vysoká teplotní odolnost při vysokých teplotách přes 350 °C a stabilita při naprogramovaných teplotních cyklech.
Pokud pracujete v laboratoři zaměřené na potravinářské, toxikologické nebo environmentální analýzy a používáte plynový chromatograf s hmotnostní detekcí, jistě víte, jak je důležité dodržovat inertnost a čistotu celého GC/MS systému. Při analýzách velmi aktivních látek se doporučuje používat materiály s vysoce inertním povrchem, které mají právě <a href="https://gcms.cz/library?mainauthorItems=10&amp;search=UltiMetal+Flexible">UltiMetal Flexible Ferule</a>. Kromě zmíněných ferulí Agilent Technologies vyrábí také další spotřební materiál (linery, kolony, zlatá těsnění, atd.) jako komplexní řešení tzv. ultra inertní cesty pro ideální průtok vzorku s obsahem aktivních sloučenin od nástřiku až po detektor.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Altium_International_Obrazek_1_ukazka_Ulti_Metal_Flexible_feruli_s_ruznymi_tvary_v_zavislosti_na_pouzite_spojce_a_kolone_4d01f18b4a/Altium-International-Obrazek-1-ukazka-UltiMetal-Flexible-feruli-s-ruznymi-tvary-v-zavislosti-na-pouzite-spojce-a-kolone.jpg" alt="Altium International: Obrázek 1. ukázka UltiMetal Flexible ferulí s různými tvary v závislosti na použité spojce a koloně"/>
<h4>Samoutahovací matice</h4>
<a href="https://gcms.cz/library?mainauthorItems=10&amp;search=Self+Tightening+Column+Nuts">Agilent Self Tightening Column Nuts</a>; „samoutahovací matice“ eliminuje potřebu pravidelného dotahování spojů jednou provždy.
<h4>Vlastnosti:</h4>
<ul>
<li>robustní konstrukce z nerezové oceli ve dvou provedeních viz Obr. 2a a Obr. 2b 
</li>
<li>použití s krátkými ferulemi ze slitiny grafitu/polyimidu (rozměr ferule závisí na ID kolony) 
</li>
<li>tepelná odolnost přes 350 °C
</li>
<li>stejná matice jak u nástřiku, tak před detektorem – pouze jeden typ ferulí pro upevnění z obou stran kolony
</li>
<li>krátké ferule umožňují větší dotažení závitu, zlepšují těsnosti spoje
</li>
<li>spolehlivý výkon – inovativní píst neustále tlačí na ferule, čímž udržuje těsnost i po stovkách nástřiků
</li>
<li>úspora času – není potřeba dotahování po opakovaných teplotních cyklech
</li>
<li>snadné použití – spolehlivě bez použití nářadí
</li>
<li>rychlejší údržba – těsnění s nízkým točivým momentem brání ferulím před rozpadnutím
</li>
<li>menší krvácení kolony – delší životnost kolony
</li>
</ul>
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Altium_International_Obrazek_2a_Matice_pro_MSD_a_ECD_2b_Matice_pro_nastrik_a_FID_detektory_c1f51038d0/Altium-International-Obrazek-2a.-Matice-pro-MSD-a-ECD-2b.-Matice-pro-nastrik-a-FID-detektory.jpg" alt="Altium International: Obrázek 2a. Matice pro MSD a ECD 2b. Matice pro nástřik a FID detektory"/>
<h3>Přehled nejnovější literatury Agilent Technologies pro co nejlepší spojení v plynové chromatografii <a href="https://gcms.cz/library?from=2022&amp;mainauthorItems=10&amp;publicationTypeItems=7-5-4&amp;search=Self+Tightening+Column+Nuts+UltiMetal+Plus+&amp;to=2023">v knihovně LabRulezGCMS</a></h3>
<ul>
<li>Making Better Connections in GC and GC/MS Systems (Prezentace | 2023)
</li>
<li>GC separation troubleshooting (Prezentace | 2023)
</li>
<li>Take the Trouble Out of Troubleshooting - Gas chromatography (Prezentace | 2023)
</li>
<li>Back to Basics: Installation, Care, and Maintenance of GC Columns (Prezentace | 2022)
</li>
<li>Tips and Tricks: Best Practices for Column Installation and Care of GC Columns (Prezentace | 2023)
</li>
<li>Keep your GC Column Alive: Tips and Tricks for Extending Column Lifetime (Prezentace | 2023)
</li>
<li>Tips and tricks for troubleshooting GC column bleed problems (Prezentace | 2022)
</li>
<li>GC Tips and Tricks - Your guide to integrated, intuitive GC intelligence (Příručky | 2022)
</li>
<li>Lost and Found: Troubleshooting Missing Peaks in GC Analysis (Prezentace | 2022)
</li>
</ul>

UltiMetal Plus Flexible ferule a samoutahovací matice Agilent Technologies: lepší ochrana GC kolon

Nechte se inspirovat krátkými videi ze série GC Troubleshooting v <a href="https://gcms.cz/article/854">planové chromatografii</a> z produkce společnosti Agilent Technologies. Během několika málo minut tak zjistíte, jak snadno lze některým problémů předcházet či je efektivně řešit.
<h3>Instalace GC kolony</h3>
Správná instalace kolony je jednou z klíčových znalostí pro dosažení dobrého výkonu plynového chromatografu. V následujících 2 videích vás servisní technici Agilent provedou jednotlivými kroky potřebnými k správné instalaci a úpravě GC kolony.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Agilent_GC_Column_Installation_Part_1_GC_Troubleshooting_Series_1689b791bb/Agilent-GC-Column-Installation-Part-1-GC-Troubleshooting-Series.png" alt=""/>
<a href="https://www.youtube.com/watch?v=Nx1FzgwlCiE">VIDEO: Agilent GC Column Installation - Part 1 - GC Troubleshooting Series</a>
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Agilent_GC_Column_Installation_Part_2_GC_Troubleshooting_Series_9d1a8191dd/Agilent-GC-Column-Installation-Part-2-GC-Troubleshooting-Series.png" alt=""/>
<a href="https://www.youtube.com/watch?v=YmkKikaakSI">VIDEO: Agilent GC Column Installation - Part 2 - GC Troubleshooting Series</a>
<h3>Výměna lineru, septa, splitovacího trapu a zlatho těsnění</h3>
Zjistěte, jak snadno lze vyměnit liner, septum a zlaté těsnění u Agilent 7890 GC. V posledním videu se dozvíte, že pro bezproblémový chod plynového chromatografu je vedle správné údržby inletu i nezbytná údržba/výměna splitovacího ventilu, kterou si ve videu ukážeme.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Agilent_Replacing_Your_Liner_Septum_and_O_Ring_GC_Troubleshooting_Series_42ca5fa200/Agilent-Replacing-Your-Liner-Septum-and-O-Ring-GC-Troubleshooting-Series.png" alt=""/>
<a href="https://www.youtube.com/watch?v=mExb2mj0eEk&amp;feature=youtu.be">VIDEO: Agilent Replacing Your Liner, Septum and O-Ring - GC Troubleshooting Series</a>
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Agilent_Replacing_the_Gold_Seal_GC_Troubleshooting_Series_9430e824a3/Agilent-Replacing-the-Gold-Seal-GC-Troubleshooting-Series.png" alt=""/>
<a href="https://www.youtube.com/watch?v=uMTKMbmSvRI">VIDEO: Agilent Replacing the Gold Seal - GC Troubleshooting Series.</a>
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Agilent_Change_the_Split_Vent_Trap_GC_Troubleshooting_Series_7eb3bbccfe/Agilent-Change-the-Split-Vent-Trap-GC-Troubleshooting-Series.png" alt=""/>
<a href="https://www.youtube.com/watch?v=vIoHnW5NKBE">VIDEO: Agilent Change the Split Vent Trap - GC Troubleshooting Series</a>
Nevíte si rady? Napište nám. Náš tým vyškolených a certifikovaných servisních techniků si s Vaším problémem poradí.
A nebo se přihlašte na naše HPST hardwarové GC a GCMS školení.
Servisní oddělení HPST pro Vás pravidelně organizuje hardwarová školení zaměřená na instrumentaci Agilent Technologies a důrazem na diagnostiku hardwarových problémů a údržbu systému.
<a href="https://gcms.cz/products/114">1. HPST GC školení - uživatelské dovednosti a diagnostika</a>
<a href="https://gcms.cz/products/115">2. HPST MS (single-quad/QQQ pro GC) školení - uživatelské dovednosti a diagnostika</a>
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/application::product.product/HPST-skoleni-1.jpg" alt="HPST GC a MS (single-quad/QQQ pro GC) školení"/>
<h3>Literatura a Webináře údržba a řešení problémů v plynové chromatografii</h3>
<a href="https://gcms.cz/library?mainauthorItems=10&amp;search=troubleshooting%20maintainance">V Knihovně LabRulezGCMS</a> naleznete několik stovek příruček, prezentacá nebo technických článků s podrobným popisem řešení nejčastějších i těch méně častých problému nebo údržby v plynové chromatografii.
<a href="https://gcms.cz/webinars?companyId=37">V sekci Webináře</a> od Agilent Technologies a HPST naleznete desítky užitečných záznamů přednášek nejen k troubleshootingu nebo údržbě Vašich GC a GCMS systému.

Údržba Vašeho GC - série videí od Agilent Technologies

V tomto případě je plocha píku analytu nacházející se za časem retenčního maxima větší než plocha píku analytu před časem retenčního maxima. Symetrii píku definuje faktor As*, který je v případě chvostujících píků větší než 1.2. A*s je poměrem b ku a, kdy b je šířkou píku v 10 % jeho výšky za retenčním časem maxima a a je šířkou píku v 10 % jeho výšky před retenčním časem maxima.**
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Asymetrie_chromatografickeho_piku_f044130a94/Asymetrie-chromatografickeho-piku..png" alt="Asymetrie chromatografického píku."/>
<h3>Kdy dochází k tomuto jevu a co je jeho příčinou?</h3>
Odpovědí na tuto otázku může být více. Prvním místem, na které byste se na chromatografu měli zaměřit, je inlet a jeho pravidelná údržba. Nejběžnější příčiny chvostujících píku se totiž často skrývají právě zde.
Pakliže jsou píky zprvu symetrické a s každým dalším nástřikem vzorku se jejich tvar zhoršuje, jedná se o klasický příklad nástřiku znečištěného vzorku.
Při nástřiku jednoho či několika obzvláště špinavých vzorků se jev může vyskytnout i ve velmi krátkém čase v rozptylu několika analýz. Původcem jsou netěkavé látky hromadící se na koloně v průběhu měření, které následně mohou způsobit, jak posun retenčních časů, tak chvostování píků. Znečištění mohou působit i částečně těkavé látky, které v průběhu separace zkondenzují na koloně. Vzhledem k částečnému odparu a neustálému posunu systémem s každým dalším nástřikem mohou postupně pokrýt celou kolonu.
Stěžejním bodem prevence znečištění cesty vzorku je pravidelná údržba inletu a zkracování kolony. Většina nečistot se z povahy své netěkavosti hromadí hned zkraje kolony. Pravidelné seřezávání kolony o zhruba 20 cm jednoduše odstraní z cesty vzorku znečištěný úsek a často odstraní veškerý vliv nečistot na kvalitu výstupu chromatografu.
Řešením může být i proplach kolony rozpouštědlem, nicméně většina laboratoří si tuto údržbu nemůže dovolit vzhledem k vyšší časové náročnosti.
Nejúčinnější prevencí je pochopitelně vůbec nedopustit nástřik netěkavých nečistot do systému. Vhodně zvolená extrakce, či přečištění vzorku jsou prostředky, se kterými lze v tomto ohledu docílit znatelných výsledků. Pokud máte prostor, vybavení a zkušenosti pro optimalizaci přípravy vzorku před každým nástřikem (mikroextrakce na tuhé fázi, headspace nástřik, filtrace nečistot), určitě se tento krok projeví prodloužením životnosti vaší kolony. (<a href="https://www.labicom.cz/produkty/spotrebni-material/plynova-chromatografie-prislusenstvi/gc-kolony-predkolony/agilent">Přehled kolon od Agilent Technologies</a>) 
Další variantou je začlenění tzv. retenčního gapu neboli předkolony mezi inlet a vlastní kolonu. Retenční gap je vlastně alternativou neustálého zkracování analytické kolony. Místo kroku seříznutí vlastní kolony, tak při zhoršení symetrie píků, nebo posunu retenčních časů, jednoduše vyměníte pouze retenční gap. Výhodou je, že s tímto řešením nezasáhnete do jednoho z klíčových parametrů separace, kterým je délka kolony. Při zkracování vlastní kolony tak neustále činíte a vystavujete se následně nutnosti přizpůsobení ostatních parametrů separace (teplota, průtok apod.).
Nečistoty lze zachytit i v prostoru inletu. Docílíte tak například s využitím lineru se skelnou vatou ve spodní části. Efekt skelné vaty lze vidět na obrázku. Nečistoty jsou zachyceny ve skelné vatě a nevstupují dále do systému. Bohužel tento prvek zachytí pouze netěkavé nečistoty, ty částečně těkavé prostupují vzhledem k neustálému částečnému odparu na kolonu. Odstranění částečně těkavých látek docílíme pouze vypálením kolon.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Linery_se_skelnou_vatou_b6df89a7ab/Linery-se-skelnou-vatou..jpg" alt="Linery se skelnou vatou."/>
Vypálení kolony je vlastně jen pouhé zahřátí systému na 1-2 hodiny k teplotnímu limitu dané kolony. Takto by mělo dojít k uvolnění a průchodu většiny částečně těkavých látek ven ze systému.
Příčina znečištění se může dále nacházet kdekoliv v prostoru injektoru. Udává se, že tato část systému je příčinou zhoršení kvality výstupu až v 90 % případů. Pravidelná údržba nástřikových prostor by měla zahrnovat výměnu špinavého lineru, vyčištění všech ostatních prostor injektoru, výměnu zlatého těsnění i výměnu septa. (<a href="https://gcms.cz/article/873">Podívejte se na videa věnující se správné instalaci kolon, výměně lineru, septa, splitovacího trapu a zlatého těsnění</a>)
Pokud jste provedli vše zmíněné a stále pozorujete na výstupu z detektoru chvostující píky, může se jednat o důsledek pozměněné aktivity na koloně. K tomuto jevu dochází, pokud analyzujete látky, které chemicky interagují se stacionární fázi kolony. Pozměněné vlastnosti kolony na jejím začátku lze opět odstranit jejím zkrácením. Postup popisuje aplikační specialista Daron Decker v čase 2:45.
Předně přerušíte veškeré analýzy a počkáte, než prostředí pece a inletu zchladnou na běžnou teplotu. Následně uvolníte kolonu z inletu (pozor na neposedné ferulky) a pustíte se do toho. Kolonu uchopíte do jedné ruky a do druhé si vezmete keramický metr s řeznou hranou (cokoliv jiného s ostrou hranou). Keramický metr má dva okraje, hrubý a hladký. Hladkým okrajem lehce kolmo přejedete přes místo, ve kterém chcete kolonu zkrátit. Principem pohybu je narušit svrchní polyimidovou vrstvu, zajišťující ohebnost kolony, a vnitřního skleněného jádra se pouze dotknout. Kolonu byste neměli tímto pohybem ještě zcela zlomit. Následně jen lehce zatlačíte na oddělený konec a kolona by se měla ochotně zlomit. Tímto postupem se snažíte zajistit co nejsouměrnější zlom celým průměrem kolony. Hladký zlom je následně důležitý pro vstup vzorku na kolonu. Čistý řez tohoto konce zkracuje úsek kolony, čas, v němž je vzorek nanesen na kolonu, což přispívá rozlišení systému.
Pokud se aktivovaná pasáž kolony nachází ve vzdálenějších částech, její zkracování nepomáhá, bohužel se jedná o nevratné poškození stacionární fáze a řešením je pouze instalace nové kolony.
Při časté analýze aktivních látek je doporučováno používat <a href="https://gcms.cz/products/171">ultra inertních kolon</a>. Tyto kolony jsou tvořeny speciálně inertizovanými stacionárními fázemi a cíleny právě pro analýzy chemicky aktivních analytů. Stárnutím mohou i tyto podlehnout chemickému působení některých agresivních analytů, ale jejich odolnost je větší a životnost delší.
Některé agresivní, velmi reaktivní analyty budou vždy vytvářet chvostující píky a tuto asymetrii nikdy zcela neodstraníte ani s použitím ultra inertních kolon. 
K optimalizaci může občas ještě přispět pasivace kolony. Jedná se o několikanásobné promytí kolony vysokými koncentracemi aktivního analytu, který pokryje většinu reaktivních míst stacionární fáze a během následné analýzy samotných vzorků je tak zajištěna její jednotná afinita. Pasivace je vždy pojena s konkrétním analytem. Její kladný efekt na symetrii píků bývá však často jen nepatrný.
Příčina chvostování píků může tkvět i v nerovnoměrnosti průchodu vzorku systémem. Jako příklady mohou sloužit nadměrný mrtvý objem systému, špatná instalace kolony, různé obstrukce toku nosného plynu, nebo třeba opět výrazná kontaminace kolony. Tyto příčiny pozměňují proudění vzorku systémem a prostorově narušují jeho rovnoměrnou separaci. Ověřit lze nástřikem analytu, o kterém víte, že je zcela inertní ke stacionární fázi kolony a převážně těkavý čili během separace stráví většinu času v mobilní fázi. Za normálních okolností tak vždy tvoří symetrické píky. Za tímto účelem se nejčastěji používají metan či butan. Pokud vám píky těchto plynů chvostují, pak víte, že máte v systému co do činění s obstrukci toku vzorku.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Nastrik_zcela_inertniho_analytu_ke_stacionarni_fazi_kolony_75aadbe7cf/Nastrik-zcela-inertniho-analytu-ke-stacionarni-fazi-kolony..jpg" alt="Nástřik zcela inertního analytu ke stacionární fázi kolony."/>
Jak již bylo zmíněno, důležitým předpokladem symetrických píků je správně nainstalovaná kolona. Chyby při instalaci mohou vést ke vzniku turbulentního proudění kolonou, nerovnoměrné separaci složek vzorku a obvykle deformaci tvaru píků v podobě chvostování. Při instalaci je tedy důležité seříznout kolonu čistým řezem, vsunout do inletu či detektoru vhodnou délku kolony a zajistit veškeré spoje proti netěsnostem. Vsunutím kolony příliš hluboko do prostoru inletu zbytečně rozšiřujeme mrtvý objem systému, vsunutím nedostatečně hluboko zase konec zůstane v kontaktu se zlatým těsněním, u jehož ústí se vyskytuje turbulentní proudění, jehož charakter se následně promítá i do průtoku vzorku kolonou a zabraňuje rovnoměrné separaci. Na straně inletu se doporučuje délka přesahu 4-6 mm nad ferulkou. Na detektorovém konci se vhodný přesah liší, ale obecně se doporučuje opatrně vsunout konec až kam prostor dovolí a následně pouze drobně povytáhnout zpět (pocitově, 1-2 mm).
<h3>Nepřehlédněte</h3>
Přehled kolon od Agilent Technologies <a href="https://www.labicom.cz/produkty/spotrebni-material/plynova-chromatografie-prislusenstvi/gc-kolony-predkolony/agilent">zde</a>.
Přehled videí věnující se údržbě Vašeho GC (instalace GC kolony, výměna lineru, septa, splitovacího trapu a zlatého těsnění) od Agilent Technologies naleznete v článku <a href="https://gcms.cz/article/873">Údržba Vašeho GC - série videí od Agilent Technologies</a>
Nevíte si rady? Servisní oddělení HPST pravidelně organizuje <a href="https://hpst.cz/skoleni/analyticka-chemie-hardwarova-skoleni">hardwarová školení zaměřená na instrumentaci Agilent Technologies</a> s důrazem na diagnostiku hardwarových problémů a údržbu systému.
Přehled hardwarových a softwarových školení servisního a aplikačního oddělení HPST naleznete také v <a href="https://gcms.cz/products?category=36&amp;distributorItems=37">sekci Produkty</a>.

Údržba Vašeho GC. Chvostující píky.

Webináře

Aplikace

Akademie

Osobnosti

Plasty

Životní prostředí

Potraviny

Vody

Zdraví

Přednáška

Vědecký článek

Rozhovor

Toxikologie

Popularizace

Věda a výzkum

Software

Covid-19

Kariéra

Článek

Laboratoře

Různé

Produkt

Video

Poster

Nejbližší akce

Typ novinky

Zaměření

Je autorizovaným distributorem společnosti Agilent Technologies pro Českou republiku v oblastech chromatografie (GC, HPLC, UHPLC, kapilární elektroforéza) a hmotnostní spektrometrie (GC/MS, LC/MS, CE/MS), disolučních aparátů, molekulární (UV-Vis, UV-Vis-NIR, fluorescence, FTIR analyzátory a mikroskopy) a atomové spektroskopie (ICP-OES, ICP-MS, AAS), a v neposlední řadě také v oblasti molekulární biologie a genomiky (analýza nukleových kyselin a proteinů, microarray skenery a skla, PCR & RT-PCR, qPCR, řešení pro NGS, reagencie pro mutagenezi a klonování, sondy FISH a další).

Altium International

Vše ze světa analytické chemie na jednom místě. Propojujeme lidi při řešení jejich problémů. U nás naleznete všechny potřebné informace snadno, rychle a přehledně. Přestaňte hledat a začněte nacházet.

LabRulez

Workshop: Automatizace analýz a kontrola kvality v potravinářském, krmivářském a farmaceutickém průmyslu

IV. Škola archeometrie 2026

ALS Kurz Analýzou HYDRAULICKÝCH a TURBÍNOVÝCH olejů k větší efektivitě výroby

The science of next-gen ingredients: fermentation, formulation and function

The Data Driven Plant; How AI Transforms Chemical Manufacturing

Process Raman: A Reliable and Versatile Tool For Downstream Process Monitoring and Control For mAB Production