Optimized SPE for UPLC/MS/MS and GC/MS/MS Determination of THC and its Metabolites in Urine and Blood

Význam tématu

Analýza delta9-tetrahydrokanabinolu (THC) a jeho hlavních metabolitů OH-THC a COOH-THC v moči a krvi je klíčová pro forenzní a klinické vyšetření expozice konopí. Stanovení THC v krvi poskytuje informaci o nedávném požití a možném ovlivnění uživatele, zatímco detekce karboxylového metabolitu v moči dokládá delší dobu požití.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo vyvinout jednotný protokol přípravy vzorků založený na SPE (Oasis MAX), který umožní současné stanovení THC, OH-THC a COOH-THC v krvi i moči a je kompatibilní s UPLC/MS/MS i GC/MS/MS analýzou. Důraz byl kladen na rychlost, účinnost extrakce a špičkové výkony včetně linearity, přesnosti a limitu detekce.

Použitá metodika a instrumentace

Pro separaci a detekci byly využity tyto kroky a přístroje:

• Sample pre-preparation: precipitace krve acetonitrilem, alkalická hydrolýza moči.
• SPE extrakce: Oasis MAX (mixed-mode strong anion-exchange) bez nutnosti odpařování vzorků krve.
• Derivace pro GC/MS/MS: silylace pomocí BSTFA/TMCS.
• UPLC/MS/MS: ACQUITY UPLC s kolonkou BEH C18 (2,1×100 mm, 30 °C) v gradientu formiát–voda/acetonitril, detekce na Quattro Premier XE (ESI+ pro THC a OH-THC, ESI− pro COOH-THC).
• GC/MS/MS: Quattro micro GC/MS/MS s kapilární kolonou RTX-5MS (30 m×0,025 mm×0,25 µm), helium, splitless injekce, teplotní program 100–300 °C.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda pro obě biologické matice i obě detekční techniky vykázala vynikající linearitu (r^2 > 0,99), preciznost (RSD < 15 % při 0,5 ng/mL) a recovery 78–92 % s potlačeným ionizačním efektem (< 10 %). LOQ bylo stanovené na 0,5 ng/mL. UPLC/MS/MS nabídlo rychlejší analýzu bez derivace, GC/MS/MS poskytlo komplementární data se srovnatelnou citlivostí.

Přínosy a praktické využití metody

Jednotný SPE protokol výrazně zjednodušuje přípravu vzorků, minimalizuje ztráty lipofilních analytů a odstraňuje potřebu odpařování krve. Metoda nachází uplatnění v forenzní toxikologii, klinických laboratořích i při kontrolách na pracovištích.

Budoucí trendy a možnosti využití

Další rozvoj může mířit k plné automatizaci SPE v kombinaci s UPLC/MS/MS, rozšíření panelu kanabinoidů, využití pokročilých ionizačních technik pro zlepšení citlivosti a aplikaci v dopravní toxikologii.

Závěr

Mixed-mode Oasis MAX SPE spolu s moderními tandemovými hmotnostními spektrometry tvoří robustní a univerzální metodu pro analýzu THC a jeho metabolitů v krvi a moči s vynikající citlivostí, přesností a reprodukovatelností.

Reference

• Young, M.S.; Martin, J.T. Optimized SPE for UPLC/MS/MS and GC/MS/MS Determination of THC and its Metabolites in Urine and Blood; Waters Corporation; Application Note 720003738EN, 2010.