Optimized SPE for UPLC-MS/MS and GC-MS/MS Determination of THC and Metabolites in Urine and Blood

Význam tématu

Analýza Δ9-THC a jeho metabolitů v moči a krvi je klíčová pro soudní toxikologii, dopingové kontroly, lékařské účely a kontrolu kvality. Spolehlivá detekce psychoaktivních látek i nepsychoaktivního metabolitu potvrzuje expozici a může indikovat stav ovlivnění.

Cíle a přehled studie

• Vytvořit jednotný protokol SPE pro krev a moč
• Optimalizovat UPLC-MS/MS a GC-MS/MS analýzu THC, OH-THC a COOH-THC
• Hodnotit intradení a interdnení reprodukovatelnost metod

Použitá metodika a instrumentace

Vzorky krve jsou precipitovány acetonitrilem, moč podléhá alkalické hydrolýze s 10 N NaOH, následnému pH vyrovnání a naložení na Oasis MAX SPE kartuši. SPE zahrnuje kondicionaci, naložení vzorku, dvě promytí a krok eluce hexan/ethylacetát/kyselina octová.
Analýza LC-MS/MS probíhá na kolóně Acquity BEH C18 (2,1 × 100 mm) s mobilní fází 0,1 % HCOOH/voda a acetonitril, gradientem 60→90 % B za 4 min a detekcí na Quattro Premier XE (ESI+ pro THC a OH-THC, ESI– pro COOH-THC) v režimu MRM.
GC-MS/MS využívá Agilent 6890 GC s kolónou RTX-5MS (30 m × 0,025 mm × 0,25 μm), nosný plyn helium, program teplot 100 °C (1,5 min) → 200 °C @ 40 °C/min (4 min) → 240 °C @ 8 °C/min (1 min). Vzorky se derivatizují BSTFA/TMCS (99:1) při 70 °C po 15 min a detekují pomocí EI-MRM.

Hlavní výsledky a diskuse

• Recovery 85–93 %, ion-suprese < 10 %
• Lineární kalibrace 0–100 ng/mL (r2 > 0,99)
• LOQ < 5 ng/mL pro všechny analyty
• Intradení i interdnení RSD interního standardu < 10 %
• Doba analýzy: LC-MS/MS ~ 5 min, GC-MS/MS ~ 25 min
• Bez zásadních interferencí v různých matricech

Přínosy a praktické využití metody

• Jednotný SPE krok pro krev a moč šetří čas a náklady
• Vhodné pro forenzní, klinické a QA/QC laboratoře
• Rychlá a citlivá stanovení THC, OH-THC a COOH-THC
• Kompatibilita s LC-MS/MS i GC-MS/MS platformami

Budoucí trendy a možnosti využití

• Automatizace SPE a high-throughput workflow
• Rozšíření panelu monitorovaných látek
• Integrace vysokorozlišovací MS pro screeningové aplikace
• Vývoj nových sorbentů se zvýšenou selektivitou
• Ambientní ionizační techniky pro rychlé testy v terénu

Závěr

Navržený jednotný SPE protokol s Oasis MAX dosahuje vynikajících parametrů citlivosti, linearity a reprodukovatelnosti u LC-MS/MS i GC-MS/MS analýzy THC a jeho metabolitů. Metoda je efektivní, univerzální a snadno implementovatelná v široké škále analytických laboratoří.

Reference

• Michael S. Young, John T. Martin. Optimized SPE for UPLC-MS/MS and GC-MS/MS Determination of THC and Metabolites in Urine and Blood. Waters Corporation