XXIII. Mezinárodní konference o separační chemii a analýze toxických látek: Otravy tisem

Význam tématu

Otravy tisem představují závažný forenzní problém vzhledem k vysoké toxicitě taxinových alkaloidů obsažených v čeledi Taxaceae. Rychlé a spolehlivé stanovení markerů otravy, zejména 3,5-dimethoxyfenolu, je nezbytné pro potvrzení expozice a určení příčin úmrtí v soudní lékařské praxi i v trestním řízení.

Cíle a přehled studie

Práce pplk. RNDr. Ivo Berouna, CSc. na XXIII. konferenci o separační chemii a analýze toxických látek shrnuje:

• karakteristiku toxických složek tisu červeného (Taxus baccata),
• postupy přípravy biologických i rostlinných vzorků na analýzu,
• využití GC-MS pro detekci 3,5-dimethoxyfenolu jako klíčového markeru,
• praktické ukázky případových studií intoxikace.

Použitá instrumentace

Pro separaci a detekci markeru intoxikace byly použity:

• plynový chromatograf Agilent 7890B s kolonou HP-5MS (30 m × 0,25 mm × 0,25 µm),
• hmotnostní detektor Agilent 5977B HES GC/MSD, režim Scan, zdroj 230 °C, kvadrupól 150 °C.

Použitá metodika

Vzorky (jehličí, semena, výluhy, kontaminované povrchy) se upravují následovně:

1. okyselení 7% HCl a inkubace při 80 °C po dobu 15 min pro enzymatickou hydrolýzu taxikatinu,
2. extrakce ethylacetátem po ochlazení na laboratorní teplotu,
3. odstředění a odběr 1 ml organické fáze pro analýzu GC-MS,
4. chromatografické parametry: inlet 250 °C, He 1 ml/min, program teploty 60 °C→180 °C→280 °C (celkem 30 min).

Hlavní výsledky a diskuse

Hydrolýza vzorků významně zvyšuje koncentraci 3,5-dimethoxyfenolu až 2,75× u čerstvých a 1,35× u ročních vzorků jehličí. Takto získaná metoda umožňuje detekci i stopových množství markeru. Případové studie dokumentují suicidální požití tisu u dvou osob různého pohlaví a sociální situace, kdy analýza prokázala přítomnost markeru v žaludečním obsahu a biologických tkáních.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda nabízí:

• vysokou citlivost a specificitu pro potvrzení otravy tisem,
• jednoduchou přípravu vzorků pro soudní toxikologii,
• možnost aplikace na různé matriály včetně kontaminovaných nádob.

Budoucí trendy a možnosti využití

Ve forenzní a environmentální analýze lze očekávat:

• rozšíření o vysoce přesné hmotnostní spektrometry pro screening dalších aglykonů (myrtenol, 1-okten-3-ol),
• vývoj silnějších markerů stability pro dlouhodobé skladování vzorků,
• automatizaci přípravy a moderní separační techniky (UHPLC, GC×GC).

Závěr

Prezentovaná metoda GC-MS s cílenou hydrolýzou taxinatů umožňuje spolehlivou detekci intoxikace tisem v biologickém i rostlinném materiálu. Je vhodná pro rutinní forenzní analýzy a přináší důležité důkazy v soudních případech.

Reference

• Froldi R, Croci P.F, Dell'Acqua L, Farè F, Tassoni G, Gambaro V. Preliminary gas chromatography with mass spektrometry determination of 3,5-dimethoxyphenol in biological specimens as evidence of taxus poisoning. J Anal Toxicol. 2010 Jan–Feb;34(1):53–56.
• Varlet V, Augsburger M. Monitoring of aglycons of yew glycosides (3,5-dimethoxyphenol, myrtenol and 1-octen-3-ol) as first indicator of yew presence. Drug Test Anal. 2013 Jun;5(6):474–479.