Avoiding Cross Talk In 96-well Based Sample Preparation

Význam tématu

Vysokopropustne zpusoby pripravy vzorku v destivkach 96 jamek prinasi riziko mezi jamkoveho preslechu a aerosolove kontaminace. Minimalizace tohoto efektu je dulezita pro spolehlivost kvantitativnich analyz a prevenci falezne pozitivnich vysledku.

Cíle a přehled studie / článku

Cilem publikace je predstavit prakticke strategie ke snizeni nebo eliminaci cross talk v 96 jamkovem formatu sample preparation. Autoři popisuji optimalizaci konstrukce extrakcni a sbiraci destivky, komparaci vakua a pozitivniho tlaku, intervenci pri evaporaci a nastavovani parametru pro misi vzorku.

Použitá metodika a instrumentace

• Porovnani SPE SLE a proteinove precipitace v ruznych destivkach se zamerem na delku a pozici luer hrotu
• Automatizovane zpracovani pomoci Biotage Extrahera Automation System
• Manualni pozitivni tlak s Biotage Pressure 96 manifold
• Manualni vakuova extrakce s Biotage VacMaster-96 manifold
• Evaporace na Biotage SPE Dry 96 s pouzitim Biotage ACT Plate Adapter
• Optimalizace objemu rozpoustedla a salts out postup pro volatili analyty pri vysokych koncentracich
• Resuspendace a misi vzorku s dodrzenim maximalnich objemu pro ruzne typy destivek

Hlavní výsledky a diskuse

Spravne zasunuti luer hrotu do kolekcni destivky a optimalni volba mezi pozitivnim tlakem a vakui vedou k raznemu snizeni sputtering a aerosolove kontaminace. Biotage ACT Plate Adapter ukazal vyraznou eliminaci hot spot cross talk pri evaporaci, pri vysoke koncentraci methamphetaminu a amphetaminu je doporuceno pridat 10 ul 0.5 procentniho roztoku kyseliny chlorovodicni v methanolu pro salts out. Doporucene maximalni objemy zajistily eliminaci creep efektu pri misi vzorku.

Přínosy a praktické využití metody

• Zvyseni presnosti a reprodukovatelnosti vysledku
• Omezeni falezne pozitivnich vysledku a nutnosti opakovani
• Kompatibilita s automatizovanymi pristroji a flexibilita v laboratornich workflow
• Efektivni zpracovani termolabilnich a volatili latek

Budoucí trendy a možnosti využití

Ocekava se vyvoj novych materialu a povrchovych uprav pro dalsi minimalizaci aerosolove kontaminace, pokrocila rizeni toku v realnem case a adaptivni metody prediktivni udrzby. Integrace roboticke manipulace s destivkami muze dale zlepsit zstandarizovani procesu.

Závěr

Soustredeny pristup k navrhu destivek, zvoleni vhodneho zpusobu zpracovani, kontrole evaporace a optimalizaci objemu rozpoustedel umoznily vytvorit robustni protokol s minimalnim rizikem mezijamkove kontaminace i pri praci s volatilnimi analyty a vysokymi koncentracemi.

Použitá instrumentace

• Biotage Extrahera Automation System
• Biotage Pressure 96 Positive Pressure Manifold
• Biotage VacMaster-96 Vacuum Manifold
• Biotage SPE Dry 96 evaporator
• Biotage ACT Plate Adapter
• ISOLUTE SLE+ 96 well plates
• Shimadzu Nexera UPLC
• Sciex 5500 Triple Quadrupole Mass Spectrometer

Reference

• Marshall L et al The Effects of Plate Type on the Prevalence of Cross-well Contamination Pittcon 2011
• Biotage SPE Dry 96 and SPE Dry 96 Dual User Manual 2017 part number 415970-B
• Biotage ISOLUTE SLE plus User Guide UI304.V.3 2016
• Biotage Current Methodologies for Drugs of Abuse Urine Testing White Paper PPS443 2019