ISOLUTE® SLE+ User Guide (Supported Liquid Extraction)

Význam tématu

Podporovaná extrakce kapalina–kapalina (Supported Liquid Extraction, SLE) je klíčová technika v analytické chemii, zejména pro vzorky biologických matric (plazma, sérum, moč). Umožňuje rychlou a reprodukovatelnou extrakci širokého spektra farmak a metabolitů do organické fáze bez vzniku emulzí, dosahuje vysokého vyloučení bílkovin a fosfolipidů a snižuje iontové potlačení v LC-MS/MS analýze. Díky tomu jsou možné nižší meze kvantifikace a stabilnější výsledky v klinických, toxikologických i farmaceutických aplikacích.

Cíle a přehled studie / článku

Uživatelská příručka ISOLUTE® SLE+ popisuje konstrukci produk­tů (desky, kolony), princip extrakce, doporučené podmínky zpracování, strategie vývoje metod pro neutrální, zásadité i kyselé látky a rady k řešení potíží. Součástí je i přehled automatizace na platformách Biotage Extrahera®, VacMasterTM a PRESSURE+ a výčet doplňkového příslušenství a zařízení pro odpařování vzorků.

Použitá metodika a instrumentace

Mechanismus SLE+ spočívá v nanesení vzorku na vysoce čistý diatomitový sorbent, který imobilizuje vodnou fázi v mikrokapičkách. Organický extrakční rozpouštědlo (MTBE, DCM, etylacetát aj.) protéká sorbentem a díky velké ploše rozhraní účinně přenáší anality do eluátu. Pro zajištění průběhu extrakce se využívá jednoduchý postup naložení – odstátí – eluace za gravitačního, nebo mírného negativního/tlakového přetlaku (VacMaster, PRESSURE+) či v plně automatizovaných systémech (Biotage Extrahera®). Pro koncentrování eluátů slouží SPE Dry 96/Dual nebo TurboVap® (96, LV).

Hlavní výsledky a diskuse

• Odstranění fosfolipidů: SLE+ významně snižuje hladiny PL/lysoPL, lepší než běžné depleční sorbenty i proteinová precipitace.
• Odstranění proteinů: gelová elektroforéza ukázala kompletní vyloučení proteinů z plazmatických a sérových vzorků.
• Výnosy analytů: neutrální steroidy, NSAID, β-blokátory, kyseliny (methylmalonová) i zásadité léčivo-aminy dosahují recoveries >80 % při optimalizovaném pH a volbě rozpouštědla.
• Automatizace: Biotage Extrahera® zkracuje čas zpracování 96 vzorků z ~45 min (manuál) na ~30 min.
• Škálovatelnost: stejný protokol lze aplikovat na 200 µL–10 mL formáty srovnatelnými výnosy.

Přínosy a praktické využití metody

• Zjednodušené workflow: bez centrifugace, míchání či oddělování fází.
• Vyšší reprodukovatelnost a vyšší čistota extraktů.
• Možnost zpracování široké škály látek (neutrální, kyselé, zásadité).
• Vysoká kompatibilita s LC-MS/MS, GC-MS i dalšími detekčními metodami.
• Široké možnosti automatizace a vysokorychlostní zpracování (96 vzorků).

Budoucí trendy a možnosti využití

Integrace SLE+ do plně robotizovaných linek, použití zelenějších rozpouštědel, rozšíření na stíny polarimetrie a vysokootáčkové techniky otparování (LDTD-MS), kombinace s novými deplečními materiály pro odstranění dalších interferentů. Rozvoj aplikací v klinické farmakologii, forenzní toxikologii a monitoringu životního prostředí.

Závěr

ISOLUTE® SLE+ představuje univerzální a hospodárnou metodu vzorkové přípravy pro širokou paletu analytických úloh, poskytující vysoké výnosy, čistotu extraktů a snadnou automatizaci. Jeho využití přispívá k robustním a citlivým kvantitativním analýzám v biomedicínském i průmyslovém výzkumu.

Reference

Biotage AB. ISOLUTE® SLE+ User Guide. Biotage, 2016.