Introducing Semi-Automated GC/Q-TOF Screening with the AssayMAP Bravo Sample Prep Platform for Antidoping Control

Význam tématu

V oblasti antidopingové kontroly je klíčové dosáhnout vysoké citlivosti, selektivity a reprodukovatelnosti analýz v souladu s požadavky WADA. Současně roste potřeba rychlého screeningu s možností retrospektivní analýzy a spolehlivého detekčního okna pro dlouhodobé metabolity.

Cíle a přehled studie / článku

Článek popisuje semi-automatizovaný workflow kombinující automatizovanou SPE na platformě Agilent AssayMAP Bravo se dvěma GC/MS systémy (GC/Q-TOF a GC/TQ) za účelem zlepšení citlivosti, efektivity a možnosti retrospektivní analýzy v dopingové laboratoři.

Použitá metodika

Vzorky moči byly připraveny automatizovanou SPE (reversed phase RPS kartridže) v 96-jamkové desce, následována derivatizací MSTFA:NH4I:ethanethiol. Jako srovnání byla použita manuální LLE s ethylacetátem. Data se zpracovávala v softwaru Agilent MassHunter (Qualitative, Quantitative) a spravovala přes Accurate Mass PCDL knihovnu.

Použitá instrumentace

• Agilent AssayMAP Bravo pro automatizovanou SPE
• GC/Q-TOF Agilent 7250 s elektronovou ionizací (plný scan 50–750 m/z)
• GC/TQ Agilent 7000C s PTV injektorem v dMRM režimu

Hlavní výsledky a diskuse

• Automatizovaná SPE šetří čas (10 min vs. 45 min pro odpaření) a snižuje chyby oproti LLE.
• Detekční limity se zlepšily 2–4× pro steroidy a až 200× pro polární sloučeniny (např. furosemid).
• GC/Q-TOF poskytuje široký dynamický rozsah, vysoké rozlišení a full-scan data pro retrospektivní analýzu.
• Kvantifikace steroidů vykázala linearitu R2 > 0,997 v rozsahu jednotek ng/mL až µg/mL.
• Hmotnostní osa GC/Q-TOF je stabilní s driftem < ±1,5 ppm i bez časté kalibrace.
• Automatizovaný GC screener redukuje nutnost manuální kontroly a zrychluje validaci výsledků.
• Identifikace nonhydrolyzovaných sulfátovaných metabolitů AAS prodloužila detekční okno až na 10 dní po podání.

Přínosy a praktické využití metody

• Kapacita až 20 000 vzorků ročně zvyšuje produktivitu laboratoře.
• Retrospektivní vyhledávání nových látek v full-scan datech.
• Snížené pracovní zatížení díky automatizaci přípravy a vyhodnocení.
• Zvýšená spolehlivost detekce dlouhodobých markerů AAS.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření Accurate Mass knihoven o nové látky a metabolity.
• Integrace plně automatizovaných datových workflow.
• Využití HRMS dat pro identifikaci dosud neznámých kontaminantů.
• Aplikace postupu v jiných forenzních a toxikologických oblastech.

Závěr

Navržený semi-automatizovaný postup s použitím Agilent AssayMAP Bravo a kombinací GC/Q-TOF a GC/TQ nabízí významné zlepšení citlivosti, efektivity a spolehlivosti antidopingových analýz včetně možnosti retrospektivní kontroly.

Reference

1. Polet M. a kol. Anal. Chim. Acta 2018, 1042, 52–59.
2. Van Gansbeke W. a kol. J. Chromatogr. B 2015, 1001, 221–240.
3. Stone P. a kol. Agilent technický přehled 2009, 5990-3595EN.
4. Balcells G. a kol. J. Chromatogr. B 2016, 1022, 54–63.
5. Albertsdóttir A. D. a kol. Drug Test Anal. 2020, 12(8), 1041–1053.
6. Polet M. a kol. Drug Test Anal. 2017, 9(11-12), 1673–1684.