Fast and Comprehensive Doping Agent Screening in Urine by Triple Quadrupole GC/MS

Význam tématu

Forenzní a antidopingové laboratoře potřebují spolehlivé a rychlé metody pro screening širokého spektra zakázaných látek v moči. Metoda využívající GC-MS/MS umožňuje dosažení vysoké selektivity, citlivosti a krátkého času analýzy, což je klíčové pro dodržení limitů stanovených WADA MRPL a pro rychlý reporting výsledků.

Cíle a přehled studie / článku

Studie popisuje vývoj a validaci rychlé analytické metody na systému Agilent 7890 GC s Agilent 7000A Triple Quadrupole MS pro detekci více než 150 dopingových látek z různých tříd za méně než 8 minut. Metoda kombinuje kvantitativní stanovení endogenních steroidů se selektivní kvalitativní analýzou exogenních látek.

Použitá metodika a instrumentace

Postup vzorkování a přípravy zahrnuje

• Enzymatickou hydrolýzu 1 mL moči β-glukuronidázou (56 °C, 1,5 h)
• Liquid–liquid extrakci v diethyl etheru
• Derivatizaci MSTFA–NH4I–ethanethiol (80 °C, 60 min)

Instrumentace:

• GC: Agilent 7890 s PTV injektorem, kolona HP-1 Ultra Inert 12.5 m × 0.2 mm, H2 jako nosné plyn
• MS/MS: Agilent 7000A Triple Quadrupole, EI zdroj, režim MRM, kolizní plyn N2, quench He
• Autosampler: Gerstel MPS2

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda prokázala schopnost detekovat steroidní metabolity, β2-agonisty, narkotika, stimulační látky i kanabinoidy na nebo pod úrovní WADA MRPL. Oddělení klíčových isomerů androsteronu a etiocholanolonu bylo uchováno i při vysoké rychlosti běhu. Validace podle Eurachem potvrdila lineární kalibraci, nízké LOD, vysokou přesnost a reprodukovatelnost.

Přínosy a praktické využití metody

Výhody zahrnují univerzálnost a rychlost jediného běhu pro široké spektrum látek, snížení objemu vzorku na 1 mL, minimalizaci doby přípravy a optimalizaci nákladů. Metoda umožňuje efektivní screening i kvalifikované potvrzení přítomnosti anabolik, stimulancií i dalších dopingových skupin.

Budoucí trendy a možnosti využití

Dalším krokem je rozšíření o nové látky a jejich metabolity, automatizace vzorkového procesu a integrace s LC-MS pro komplementární analýzy. Perspektivní je také adaptace na jiné biologické matrice a rozvoj pokročilých softwarových nástrojů pro podpůrnou interpretaci dat.

Závěr

Vyvinutá GC-MS/MS metoda nabízí rychlý, citlivý a komplexní screening moči na více než 150 dopingových látek s časem analýzy pod 8 minut a splňuje požadavky WADA na moderní antidopingové testování.

Reference

• Van Eenoo P, Van Gansbeke W, De Brabanter N, Deventer K: Fast and Comprehensive Doping Agent Screening in Urine by Triple Quadrupole GC/MS, J Chromatogr A, 2010
• WADA Technical Document TD2010MRPL
• Parr MK et al.: Metabolism of androsta-1,4,6-triene-3,17-dione, Rapid Commun Mass Spectrom 23, 207–218 (2009)
• EURACHEM Guide: The Fitness for Purpose of Analytical Methods; A Laboratory Guide to Method Validation and Related Topics, 1998
• Henze MK, Opfermann G, Spahn-Langguth H, Schänzer W: Screening of β2-agonists, J Chromatogr B 751, 93–105 (2001)
• Kiousi P et al.: Two-step silylation procedure for unified analysis of 190 doping control substances by GC–MS, Bioanalysis 1, 1209–1224 (2009)