A New Kind of Amide free Polymer for Simplified, Improved SPE

Význam tématu

V bioanalytické praxi je klíčové dosáhnout co nejlepšího poměru mezi čistotou extraktu a obnovou analytů. Tradiční polymery pro SPE často selhávají v eliminaci proteinových a lipidových interferencí, což vede k iontovému potlačení a ztrátě citlivosti. Nová technologie Bond Elut Plexa s amide‐free vodoodpudivým povrchem slibuje výrazné zlepšení v odstraňování matrice a zvýšení reprodukovatelnosti bioanalytických metod.

Cíle a přehled studie

Studie si kladla za cíl:

• Vyvinout a charakterizovat nový SPE polymer s fázovým přenosem polarity v porézní částici.
• Srovnat obnovy a čistotu extraktů z lidské plazmy (100 µL vzorku) pro širokou škálu léčiv s tradičním polymerem.
• Demonstrovat lineární kalibrační křivky a vliv iontového potlačení na analytickou citlivost.

Použitá metodika a instrumentace

SPE protokol s Bond Elut Plexa:

• Přediniciace: 150 µL metanolu následovaných 150 µL vody.
• Naložení: vzorek plazmy naředěné 1:3 v 200 mM NH4Ac pH 10.
• Promývání: 2×150 µL 95:5 H2O/MeOH.
• Eluce: 2×100 µL metanolu.

LC–MS/MS parametry:

• Kolona: Agilent Pursuit C18 3 µm, 2,0 × 50 mm.
• Mobilní fáze: A = 0,1 % kyseliny formiové ve vodě; B = methanol.
• Gradient: 0–0,5 min (80 % A), 0,5–3,0 min (20 % A → 80 % B), 3,5–5,0 min (80 % A).
• Injekční objem: 10 µL; doba běhu: 4,5 min.
• MS: kolizní plyn argon, přechody Metoprolol 268,2 → 116,0 (‐15 eV), Propranolol 260,0 → 116,0 (‐13,5 eV).

Hlavní výsledky a diskuse

Všechny analyty vykázaly lineární kalibraci v rozsahu 1–1000 ng/mL s R2 > 0,999 a mezní přesností < 5 % RSD. Absolutní obnovy oproti mobilní fázové standardní směsi přesáhly 90 %. Ve srovnání s konkurenčním polymerem:

• Plexa dosáhla obnov 92–100 %, zatímco tradiční polymer jen 53–81 %.
• Iontové potlačení bylo minimální u Plexa, jak ukázaly overlappované chromatogramy mobilní fáze a extraktu.
• Propranolol vykazoval významné ztráty signálu při koeluci s proteiny na tradičním polymeru, zatímco Plexa udržela čistotu extraktu a stabilní signál.

Přínosy a praktické využití metody

Nové SPE s amide‐free povrchem přináší:

• Výrazně čistší extrakty, redukci proteinových a lipidových interferencí.
• Zvýšenou citlivost a reprodukovatelnost kvantifikace.
• Zjednodušené navržení metody díky obecné protokolární šabloně pro různé typy analyzovaných látek.

Budoucí trendy a možnosti využití

Rozvoj SPE polymerů se směruje k ještě specializovanějším povrchovým úpravám, které umožní:

• Vyšší propustnost při extrakci peptidů a metabolitů.
• Automatizaci a vysokopropustné formáty pro screeningové a klinické laboratoře.
• Integraci s ultra-rychlou chromatografií (UPLC) a moderními MS technikami pro snímání stopových úrovní v biologických maticích.

Závěr

Bond Elut Plexa představuje významný posun v oblasti SPE pro bioanalýzu lidské plazmy. Díky unikátnímu amide-free povrchu a gradientu polarity v porézní částici umožňuje dosáhnout vysokých obnov, eliminovat iontové potlačení a zjednodušit vývoj analytických metod pro široké spektrum léčiv.

Reference

Agilent Technologies. Bond Elut Plexa Application Note, 25200 Commercentre Drive, Lake Forest, CA 92630, USA. Published July 2011 (5990-8756EN).