Two dimensional chromatography: LC-GC online coupling of an Agilent 1260 Infinity LC and an Agilent 7890A GC

Význam tématu

On-line spojením kapalinové a plynové chromatografie dochází k významnému zrychlení a automatizaci analýzy složitých směsí lipidů a dalších termostabilních sloučenin. Díky sekvenčnímu frakcionování vzorku na LC a následné vysokorozlišující separaci a detekci na GC lze dosáhnout vyšší selektivity, opakovatelnosti a minimalizace ztrát či kontaminace.

Cíle a přehled studie

Studie popisuje technické řešení online propojení Agilent 1260 Infinity LC a Agilent 7890A GC pomocí 2-pozicového/6-portového ventilu Agilent 1200 Series v režimu solvent vent pro odstranění rozpouštědla v multimode inlets. Demonstrovala se analýza směsi cholesteryl esterů a porovnání výsledných chromatogramů s konvenční GC se split injekcí.

Použitá metodika

Chromatografické podmínky LC:

• Objem injekce: 2 µL
• Eluent: n-hexan/tert-butylmetyl-ether (96:4, v/v)
• Průtok: 0,200 mL/min
• Kolona: Eurospher-100Si (250×2 mm, 5 µm)
• Detekce: UV při 205 nm

GC podmínky:

• Inlet: multimode inlet (MMI) v režimu solvent vent
• Carrier: H₂, 7,8 psi
• Vent: 4 psi do 0,5 min, 1000 mL/min
• PTV program: 50 °C (0,5 min), 900 °C/min do 350 °C (2 min)
• Split purge: 2,5 mL/min po 0,5 min, gas saver 20 mL/min
• Kolona GC: Restek Rtx-200MS (30 m×0,25 mm; 0,1 µm), konstantní průtok 1,5 mL/min, tlakový program 5 psi→20 psi
• Teplotní program kolony: 40 °C(2 min)→100 °C(0 min, 100 °C/min)→310 °C(2 min, 15 °C/min)→340 °C(3 min, 1,5 °C/min)
• Detektor: FID (360 °C; H₂ 30 mL/min; Air 400 mL/min; Makeup 25 mL/min)

Použitá instrumentace

• Agilent 1260 Infinity LC
• Agilent 1200 Series 2-pozicový/6-portový switching valve (200 µL smyčka)
• Agilent 7890A GC
• PCM-C modul pro kontrolu tlaku
• MMI (multimode inlet) s PTV solvent vent režimem

Hlavní výsledky a diskuse

Online LC-GC spojení umožnilo efektivní odpaření 200 µL eluovaných vzorků bez ztráty analyzátů. Chromatogram cholesteryl esterů získaný z online propojení byl srovnatelný s GC se split injekcí. Precizní kontrola tlaku přenosové linky a odvětrávání byla klíčová pro optimální citlivost. Pro nejlepší reprodukovatelnost a citlivost byl vybrán liner Agilent 5183-4647.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda přináší plně uzavřený a automatizovaný postup, který minimalizuje riziko kontaminace a ztrát vzorku. Umožňuje rychlou a spolehlivou analýzu steryl esterů v komplexních matricích jako rostlinné oleje či potravinové obohacení.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření aplikace na další lipidové a termostabilní sloučeniny, integrace s hmotnostní detekcí a vylepšení softwarového řízení pro širší spektrum analytických úloh v QA/QC, farmaceutickém a environmentálním průmyslu.

Závěr

Online propojení Agilent 1260 Infinity LC a 7890A GC v solvent vent režimu dokázalo svoji vhodnost pro analýzu cholesteryl fatty acid esterů. Metoda nabízí vysokou citlivost, spolehlivost a výhodu automatizovaného workflow pro komplexní vzorky.

Reference

• K. Grob; M. Lanfranchi; C. Mariani, J. Am. Oil Chem. Soc. 1990, 67(10), 626–634.
• W. Kamm; F. Dionisi; L. B. Fay; C. Hischenhuber; H. G. Schmarr; K. H. Engel, J. Chromatogr. A 2001, 918(2), 341–349.
• A. Miller; T. Frenzel; H. G. Schmarr; K. H. Engel, J. Chromatogr. A 2003, 985(1–2), 403–410.
• P. Dugo; G. Dugo; L. Mondello, LC-GC Eur. 2003, 16(12a), 35–43.
• T. Hyötyläinen; M. L. Riekkola, J. Chromatogr. A 2003, 1000(1–2), 357–384.
• T. Hyötyläinen; M. L. Riekkola, Anal. Bioanal. Chem. 2004, 378(8), 1936–1938.