Nitrosamine Impurities Application Guide - Confidently Detect and Quantify Mutagenic Impurities in APIs and Drug Products

Význam tématu

Mutagenní nitrosaminy představují závažné zdravotní riziko i při velmi nízkých koncentracích v léčivých látkách (API) a hotových lécích. Jejich přítomnost byla prokázána v řadě farmaceutických produktů, zejména v sartanech (valsartan, losartan, irbesartan, candesartan, telmisartan), ranitidinu, metforminu a pregabalinu. Reakce vedoucí k tvorbě nitrosaminů probíhají během syntézy API, formulace i skladování a mohou být způsobeny kontaminací výchozích surovin, degradací, zbytkovými rozpouštědly nebo prostředím.

Cíle a přehled studie

Cílem publikace je představit validované analytické workflow pro spolehlivou detekci a kvantifikaci stopových hladin nitrosaminů (NDMA, NDEA, NEIPA, NDIPA, NDBA, NMBA a dalších) v API a léčivých formách. Prezentovány jsou dvě základní techniky: GC/MS/MS a LC/MS/MS. Metody jsou navrženy tak, aby splňovaly požadavky regulačních úřadů (FDA, EMA, EDQM, HSA) a zajišťovaly limity stanovené pro jednotlivé nitrosaminy.

Použitá metodika

GC/MS/MS workflow:

• Příprava vzorku: extrakce API či tablety dichlormethanem s interním standardem (NDMA-C13-D6), vířivé šlehaní, filtrace 0,45 µm.
• Chromatografie: WAX kolony (J&W VF-WAXms), program teplot: 40 °C držení, 20 °C/min → 200 °C, 60 °C/min → 250 °C.
• Detekce: MRM přechody pro NDMA, NDEA, NEIPA, NDIPA, NDBA; injekční režim splitless; zdroj EI, R2 kalibrace ≥ 0,998, S/N ≥ 10 při LOQ.

LC/MS/MS workflow:

• Příprava vzorku: rozpuštění API ve vodě/methanolu, centrifugace, filtrace 0,2 µm.
• Chromatografie: C18 kolony (InfinityLab Poroshell HPH-C18, Poroshell HPLC), gradientní eluce.
• Detekce: MRM na triple-quad (6470, Ultivo) nebo Q-TOF (6546), R2 ≥ 0,990, S/N ≥ 10 při LOQ.

Použitá instrumentace

Agilent GC-systémy: 8890 GC, 7697A HSS, 7693 LS, 5977B GC/MSD, 7010B GC/TQ. Agilent LC-systémy: 1290 Infinity II, 6470 LC/TQ, Ultivo LC/TQ, 6546 LC/Q-TOF. Použité kolony: J&W VF-WAXms, InfinityLab Poroshell HPH-C18, Poroshell HPH C18 pro NDMA v ranitidinu/metforminu.

Hlavní výsledky a diskuse

Metody dosahují LOQ v rozmezí 0,005–0,05 ppm (GC/MS/MS) a 0,1–0,5 ng/mL (LC/MS/MS) s odpovídajícím poměrem signálu k šumu ≥ 10. Koeficienty determinace lineárních kalibračních křivek jsou nad 0,99. Recovery studie pro API napříč skupinami léků vykázaly 86–118 % návratnost, RSD ≤ 10 %. V analyzovaných reálných vzorcích (sartanová léčiva, ranitidin, metformin, pregabalin) byly koncentrace nitrosaminů stanoveny spolehlivě pod regulačními limity.

Přínosy a praktické využití metody

• Snadná implementace v rutině farmaceutických laboratoří.
• Vysoká citlivost a selektivita díky MRM přechodům.
• Kompatibilita s požadavky FDA, EMA a dalších úřadů.
• Široké uplatnění napříč třídami léčiv.
• Rychlá příprava vzorků a přenos metod mezi pracovišti (Retention Time Locking).

Budoucí trendy a možnosti využití

• Rozšíření metod na nové nitrosaminy a jiné mutagenní kontaminanty.
• Integrace vysokorozlišovací hmotnostní spektrometrie pro potvrzující analýzy.
• Automatizace přípravy vzorků a vyhodnocení dat s využitím umělé inteligence.
• Využití v monitoringu stability a čistoty léčiv v průběhu skladování.

Závěr

Agilent GC/MS/MS a LC/MS/MS workflow pro stanovení nitrosaminů nabízí robustní, citlivé a validované přístupy splňující nejpřísnější regulační požadavky. Metody umožňují spolehlivou detekci a kvantifikaci mutagenních kontaminantů v širokém spektru farmaceutických látek.

Reference

• FDA Press Releases on nitrosamine contamination in pharmaceuticals
• EMA Press Releases
• EDQM/OMCL metody pro stanovení nitrosaminů
• HSA Singapore safety alerts