Organic acids - Standard 1 analysis of silylated organic acids in urine

Význam tématu

Analýza silylovaných organických kyselin v moči je zásadní v metabolomice a klinické diagnostice, neboť umožňuje citlivé sledování endogenních a exogenních metabolitů.

Cíle a přehled studie / článku

Účelem bylo vyvinout a validovat metodu GC/MS se silylací pro oddělení a kvantifikaci 37 organických kyselin v moči během 70 minut. Studie demonstruje její robustnost a reprodukovatelnost.

Použitá metodika a instrumentace

• Příprava vzorku: Do 2 ml moči přidány interní standardy (heptanoylglycin, tropická kyselina) a 6N HCl, následná extrakce 2×4 ml ethylacetátu s n-C23 a n-C24, sušení Na2SO4, odpaření, přidání 0,5 ml toluenu, sušení a derivatizace 200 µl směsi BSTFA/pyridin/TMCS (30 min při 60 °C). Po reakci doplněno 0,5 ml hexanu a transfer do autosampler lahvičky.
• GC/MS: Kolona Agilent CP-Sil 8 CB Low Bleed/MS (0,25 mm × 30 m, 0,25 µm), program teplot 50 °C (1 min) → 80 °C (10 °C/min) → 150 °C (1,7 °C/min) → 220 °C (3,5 °C/min) → 290 °C (20 °C/min, hold 10 min); carrier gas He 80 kPa; injektor split (270 °C), objem 1 µl; detektor MS (EI), zdroj 270 °C, analyzátor 220 °C.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda umožnila rozlišení všech 37 silylovaných kyselin s vysokou reprodukovatelností a citlivostí v rozsahu 2–10 ng na komponentu. Retenční časy korelují s polárností a molekulovou hmotností, což usnadňuje identifikaci.

• Krátké alifatické kyseliny: laktát, pyruvát, glykolát aj.
• Dikarboxylové kyseliny: jablečná, fumarátová, glutarátní aj.
• Aromatické kyseliny: fenylmléčná, benzoová, hydroxyfenylacetic aj.

Přínosy a praktické využití metody

• Rychlá a komplexní analýza širokého spektra biologicky relevantních kyselin.
• Vysoká selektivita a reprodukovatelnost vhodná pro klinická a výzkumná pracoviště.
• Podpora diagnostiky metabolických poruch a monitorování terapie.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Automatizace přípravy vzorku a derivatizace pro vyšší průchodnost.
• Integrace s vysokorozlišovací MS pro identifikaci nových biomarkerů.
• Rozšíření panelu o další polaritně odlišné metabolity.
• Využití v personalizované medicíně a toxikologii.

Závěr

Navržená GC/MS metoda se silylací poskytuje robustní a univerzální nástroj pro kvantifikaci organických kyselin v moči, vhodný pro klinické i výzkumné aplikace.

Reference

• Agilent Technologies, Inc. Application Note A01420, 2011.