Extraction of Amphetamines and Metabolites from Urine (including Elimination of Sympathomimetic Amine Interferences) Using ISOLUTE® SLE+ Prior to GC/MS Analysis

Význam tématu

Detekce a kvantifikace amfetaminů a jejich metabolitů v moči je klíčová ve forenzní toxikologii, klinické diagnostice a kontrole zneužívání látek. Tradiční kapalně-kapalná extrakce často vede k tvorbě emulzí a je časově náročná. Podpora selektivního a rychlého oddělení analytů pomocí podporované kapalinné extrakce (SLE+) významně zlepšuje efektivitu přípravy vzorků a kvalitu výsledků.

Cíle a přehled studie

Tento protokol popisuje extrakci řady amfetaminů (amphetamin, methamphetamin, MDMA, MDA, MDEA) a jejich metabolitů z moči s využitím ISOLUTE SLE+ matric. Před samotnou extrakcí je vzorek ošetřen oxidačním činidlem, které selektivně odstraní sympatomimetické rušivé látky (efedrin, pseudoefedrin) a zabrání tak jejich interferenci při kvantifikaci methamfetaminu.

Použitá metodika

Proces extrakce a následné přípravy vzorku zahrnuje:

• Předúpravu vzorku: Moč (2 mL) je pufrována fosfátovým pufrem pH 6 a ošetřena 0,3 M roztokem sodného periodiátu za 60 °C po dobu 15 minut. Po ochlazení se přidá koncentrovaný hydroxid amonný.
• Podporovaná kapalinná extrakce: Předpřipravená moč se aplikuje na ISOLUTE SLE+ kolonu (1 mL). Analyty se eluují dvojitou dávkou směsi DCM/IPA (95:5, 2× 2,5 mL) za gravitačního průtoku s následným krátkým podtlakem.
• Derivatizaci a sušení: Eluát se upraví přidáním 1 % HCl v methanolu, vysuší se proudem vzduchu nebo dusíku a poté se derivatizuje HFBA při 75 °C. Po odpaření derivatizačního činidla se vzorek zkoncentruje v ethylacetátu.

Použitá instrumentace

Pro analýzu byly využity:

• GC: Agilent 7890A QuickSwap s kolonou J&W DB-5 (30 m × 0,25 mm × 0,25 µm), nosný plyn helium (1,2 mL/min), splitless vstřik (175 °C).
• MS: Agilent 5975C v režimu selektivního iontového monitoringu (SIM) s optimalizovanými kvantifikátory pro jednotlivé analyty.

Hlavní výsledky a diskuse

Oxidační předúprava zcela odstranila efedrin a pseudoefedrin, což potvrdily chromatogramy porovnávající vzorky se spikingem před a po oxidaci. Metoda vykázala vynikající linearitu (R2 > 0,997) v rozsahu 5–500 ng/mL. Dolní kvantifikační limity (LLOQ) pro všechny amfetaminy a metabolity dosáhly hodnoty 5 ng/mL při vstupním objemu 500 µL moči.

Přínosy a praktické využití

Metoda přináší následující výhody:

• Vysoké výtěžky extrakce a reprodukovatelnost výsledků.
• Eliminace emulzí a snížení doby přípravy vzorku.
• Selektivní odstranění rušivých sympatomimetik bez vlivu na amfetaminy.
• Vhodná pro rutinní forenzní a klinickou toxikologii.

Budoucí trendy a možnosti využití

Podporovaná kapalinná extrakce SLE+ směruje k dalšímu rozvoji v oblasti automatizace a miniaturizace. Očekává se její integrace s LC/MS technikami, rozšíření na další třídy analyzátorů a využití v rámci zelené chemie díky nižší spotřebě organických rozpouštědel.

Závěr

Popsaný protokol nabízí robustní, citlivý a rychlý postup pro extrakci a kvantifikaci amfetaminů v moči. Díky selektivnímu odstranění interferentů a vynikající analytické výkonnosti je metoda vhodná pro vysoce náročné aplikace v toxikologickém a klinickém prostředí.