Extraction of gamma-Hydroxybutyric Acid (GHB) from Urine Using ISOLUTE® SLE+ Prior to GC/MS Analysis

Význam tématu

Analýza gamma hydroxybutyrátu v moči je klíčová pro forenzní toxikologii a klinické sledování. Přesná extrakce a citlivá detekce GHB je nezbytná pro spolehlivé stanovení intoxikace a terapeutické kontroly.

Cíle a přehled studie

Studie ukazuje postup extrakce GHB z lidské moči pomocí podporované kapalinné extrakce ISOLUTE SLE plus a následné stanovení metodou GC MS. Cílem bylo porovnat formát destiček 200 µL a kolón 400 µL z hlediska výtěžnosti, reprodukovatelnosti a linearity.

Použitá metodika a instrumentace

Vzorek moči byl ředěn v 0,2 mL 0,2 % kyseliny mravenčí s interním standardem GHB-D6. Extrakce probíhala na ISOLUTE SLE plus destičkách a kolónách:

• Naložení 200 µL předúpravného vzorku, absorpce 5 minut
• Eluce ethylacetátem 1 mL za gravitace a doplňkový pulz vakua
• U kolón dvě dávky ethylacetátu po 1 mL pro maximální odštěpení

Extrahát se sušil vzduchem nebo dusíkem, následně se derivatizoval BSTFA s 1 % TMCS a resuspen­doval v ethylacetátu. GC MS analýza:

• GC: Agilent 7890A QuickSwap, kolona Zebron ZB-35 (30 m × 0,25 mm × 0,25 µm), helia 1,2 mL/min, injekce 1 µL, program teploty z 70 °C do 140 °C při 10 °C/min a následně do 350 °C při 120 °C/min
• MS: Agilent 5975C v SIM modu, zdroj 230 °C, kvadrupól 150 °C, kvantifikační ionty GHB 233 a 117, GHB-D6 239 a 240

Hlavní výsledky a diskuse

Oba formáty dosáhly výtěžnosti 52 % až 69 % s RSD pod 9 % u destiček a pod 4 % u kolón. Linearity v rozmezí 2,5 až 50 µg/mL vykázaly r2 > 0,999. Nízká hladina šumu v chromatogramech podporuje vysokou spolehlivost stanovení.

Přínosy a praktické využití metody

ISOLUTE SLE plus eliminuje emulze, šetří čas a spotřebu organického rozpouštědla. Metoda splňuje forenzní požadavek cut-off 10 µg/mL a je vhodná pro klinické i toxikologické laboratoře.

Budoucí trendy a možnosti využití

Potenciál spočívá v rozšíření na další biomarkery a drogy, plně automatizovaných SLE pracovištích, integraci do high throughput screening a spojení s nejnovějšími MS technologiemi pro zrychlení analýz.

Závěr

Podporovaná kapalinná extrakce ISOLUTE SLE plus nabízí rychlou, reprodukovatelnou a lineární alternativu k tradiční LLE pro stanovení GHB v moči.

Reference

Žádné uvedeny