Extraction of Cocaine and Metabolites from Urine Using ISOLUTE® SLE+ Prior to GC-MS Analysis

Význam tématu

Analýza kokainu a jeho metabolitů v lidské moči je zásadní pro forenzní, klinické i dopingové kontroly. Efektivní extrakční postupy zkracují čas přípravy a zlepšují čistotu vzorků bez vzniku emulzí, což je důležité pro spolehlivá kvantitativní měření GC MS

Cíle a přehled studie

Cílem bylo optimalizovat podporovanou kapalně kapalinnou extrakci pomocí ISOLUTE SLE+ pro šest analytů v moči ve dvou objemových formátech 400 μL a 1 mL. Studie hodnotila výtěžnost, reprodukovatelnost, limity kvantifikace a linearitu kalibrace

Použitá metodika

Předúprava vzorku spočívala v ředění moče poměrem 1 mL moči na 1 mL 0,1 % roztoku ammonium hydroxidu a přidání interního standardu benzoylecgonine d3. Extrakce probíhala na ISOLUTE SLE+ kolonkách: pro 400 μL vzorku se aplikovaly dva nástřiky 1 mL dichlormethanu/isopropanolu 95 5, pro 1 mL vzorku dva nástřiky 2,5 mL stejného roztoku. Po extrakci se eluát vysušil v proudu vzduchu nebo dusíku a analyty se derivatizovaly směsí BSTFA TMCS (99 1) při 70 °C po dobu 20 minut

Použitá instrumentace

• ISOLUTE SLE+ kolony 400 μL (P N 820 0055 B) a 1 mL (P N 820 0140 C)
• GC Agilent 7890A se SGE BPX5 kolonkou 30 m × 0,25 mm × 0,25 μm
• Carrier helium při konstantním průtoku 1,2 mL/min, injector 250 °C split 20 1
• MS Agilent 5975C ve vybraném iontovém monitorovacím režimu SIM, zdroj 230 °C, kvadrupól 150 °C

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda poskytla výtěžnosti analyzátů v rozmezí 82 až 105 s RSD pod 8 pro všechny složky. Limity kvantifikace dosáhly 20 ng/mL pro 400 μL a 10 ng/mL pro 1 mL objemu. Kalibrační křivky prokázaly vysokou linearitu s r2 0,9978 až 0,9997. GC MS chromatogramy ukázaly jasné vrcholy bez významných interferencí matrice

Přínosy a praktické využití metody

Metoda výrazně zkracuje čas přípravy vzorků, minimalizuje spotřebu organických rozpouštědel a eliminuje emulgaci. Díky vysokým výtěžnostem a nízké variabilitě je ideální pro klinickou toxikologii, forenzní analýzu a kontrolu dopingových vzorků

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se širší automatizace přípravy vzorků na platformách robotizovaných systémů, rozšíření aplikace na LC MS pro větší spektrum analyzovatelných sloučenin a miniaturizace formátů pro snížení objemu vzorku v souladu s principy zelené analytické chemie

Závěr

Podporovaná kapalně kapalinná extrakce ISOLUTE SLE+ je rychlá, spolehlivá a vysoce účinná metoda pro extrakci kokainu a jeho metabolitů z moči s vynikajícími analytickými parametry a minimální pracovní náročností

Reference

Biotage Application Note AN802 Extraction of Cocaine and Metabolites from Urine Using ISOLUTE SLE+ 2013