Analysis of Nitroglycerin Metabolites in Blood Plasma Using NCI-GC/M

Význam tématu

Analytická detekce nitroglycerinových metabolitů a metabolitů dusíkatých kyselin v krevní plazmě je klíčová pro optimalizaci dávkování antianginózních léčiv a minimalizaci nežádoucích účinků. Vysoká citlivost měření umožňuje sledovat farmakokinetiku na úrovni nM a µM koncentrací a poskytuje informace o chování léčiva v organismu.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem studie bylo vyvinout a ověřit metodiku využívající GC-MS v režimu negativní chemické ionizace (NCI) pro souběžné stanovení nitroglycerinu, jeho glyceryl­dinitrátových a glyceryl­mononitrátových metabolitů, stejně jako nitritů a nitrátů po aplikaci nitroglycerinu.

Použitá instrumentace

• GC-MS přístrojová sestava GCMS-QP2020 NX
• Automatický injektor AOC-30i/20s U
• Kolona InertCap 17MS (30 m × 0,25 mm, film 0,25 µm)
• Režim ionizace: negativní chemická ionizace (NCI) s metanem jako reagentem

Použitá metodika

Pro stanovení nitroglycerinu a jeho metabolitů byly vzorky plazmy extrahovány toluenem, sušeny dusíkem a ošetřeny triethylaminem jako maskujícím činidlem, aby se zabránilo adsorpci na sklo. Pro metabolity NO2 a NO3 byla použita derivatizace pentafluorbenzylbromidem v acetonu při 50 °C, následné extrakce toluenem a odběr do GC-MS.

Hlavní výsledky a diskuse

• NCI-GC/MS prokázalo detekci všech glycerylnitrátových metabolitů při koncentracích od 5 nM a dusíkatých metabolitů od několika µM bez nutnosti dalšího obohacování.
• Lineární rozsah analytických kalibrací: 5–2000 nM pro GTN a GMN, 5–5000 nM pro GDN; 0,75–100 µM pro NO2, 7,5–1000 µM pro NO3 (R2 > 0,997).
• Použití triethylaminu eliminovalo ztráty způsobené adsorpcí na injekční lahvičky a zlepšilo reprodukovatelnost.
• Metabolity GMN a GDN byly v plazmě po podání nitroglycerinu detekovány s časově závislým profilem koncentrací, což odráží kinetiku biotransformace.

Přínosy a praktické využití metody

Metodika umožňuje:

• monitorovat metabolity nitroglycerinu na úrovni nM v klinických a výzkumných studiích,
• předpovídat optimální dávku pro minimalizaci hypotenzních účinků,
• zavádět vysoce citlivé QA/QC postupy v průmyslové a farmaceutické analytice.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se rozšíření sledování farmakokinetiky in vivo pomocí online hyphenovaných technik, automatizace přípravy vzorků a kombinace NCI-GC/MS s dalšími technikami jako LC-MS/MS pro komplexní metabolomické studie.

Závěr

Vyvinutá NCI-GC/MS metodika poskytuje spolehlivé, vysoce citlivé stanovení nitroglycerinu, jeho metabolitů a dusíkatých látek v krevní plazmě. Výsledky podporují možnost individualizovaného dávkování nitroglycerinu na základě monitoringu metabolitů.

Reference

• Dimitrios Tsikas, Anal. Chem, 2000, 72, 4064–4072
• Peter Akrill, John Cocker, Journal of Chromatography B, 778 (2002) 193–198
• Martin Jorgensen, Michael P. Andersen, Journal of Chromatography, 517 (1992) 167–170