ANALYSIS OF HUMAN CELL LINES USING AUTOMATIC TUBE EXCHANGE (ATEX) AND GC/MS

Význam tématu

Profilování těkavých sloučenin v buňkových kulturách nabývá na významu v metabo­lomice, toxikologii a farmaceutickém výzkumu. Automatizovaná extrakce a analýza těchto látek umožňuje citlivou detekci biomarkerů, minimalizuje manuální zásahy a zvyšuje reprodukovatelnost výsledků.

Cíle a přehled studie

Cílem studie bylo ověřit možnost automatizované přípravy a analýzy pelleted lidských buněčných linek pomocí techniky Automatic Tube Exchange (ATEX) v kombinaci s GC/MS a GC/Q-TOF. Hlavním úkolem bylo vyvinout robustní postup pro detekci a rozlišení dvou biologických vzorků (Sample A a Sample B) na základě těkavých složek.

Použitá instrumentace

• Gerstel Dual Head MultiPurpose Sampler (MPS) XT
• Gerstel Thermal Desorption Unit (TDU) s ATEX
• Gerstel Cooled Inlet System (CIS-4) s adsorbentem Tenax
• Agilent GC/MS 7890/5975
• Agilent GC/Q-TOF 7890B/7200
• Softwarové nástroje: Agilent MassHunter, Mass Profiler Professional

Použitá metodika

Vzorky pelleted buněk byly uchovávány na suchém ledu a ve formě mikrofiálek vkládány do termodesorpčních trubic (TDU Tube) pomocí ATEX. Desorpce se prováděla rampou z 50 °C na 250 °C v TDU, následovalo rychlé zahřátí CIS-4 nad 200 °C pro přenos analy­tů do GC kolony DB-5MS (30 m × 0,25 mm × 0,25 μm). Program GC: 40 °C lineární nárůst do 325 °C. Spektrální rozsah MS: 50–450 m/z.

Hlavní výsledky a diskuse

Analýza ukázala absenci významného carry-over mezi injekcemi. Ve vzorku A byly identifikovány potenciální markery: indol, dodekanamid, cholesterol (potvrzený s méně než 5 ppm odchylkou v přesné hmotnosti), palmidrol a oxazolové deriváty. Reprodukovatelnost integrací píků indolu a cholesterolu vykázala RSD 20 % a 18 %. Principal Component Analysis (PCA) jasně odlišila obě buněčné linie a blank vzorek. Extrahované iontové chromatogramy při m/z 98 ukázaly rozdílné vzorce koncentrací mezi vzorky A a B.

Přínosy a praktické využití metody

Automatizovaný ATEX přístup eliminuje zanášení nevolatilních složek do vstupního systému, čímž zvyšuje robustnost analýzy. Kombinace s GC/Q-TOF umožňuje selektivní detekci a identifikaci stopových těkavých látek. Metoda je vhodná pro vysokopropustná metabolomická a toxikologická vyšetření.

Budoucí trendy a možnosti využití

Integrace stabilních izotopových vnitřních standardů by umožnila kvantifikaci vybraných biomarkerů. Rozšíření spektra analyzovatelných látek a aplikace na další biologické či potravinové matrice přispějí k rozvoji cílené metabolomiky. Kombinace s dalšími separačními technikami a pokročilými algoritmy analýzy dat může odhalit nové diagnostické a farmakologické signály.

Závěr

Studie prokázala, že ATEX v kombinaci s GC/MS poskytuje robustní platformu pro analýzu těkavých komponent v pelleted buňkách. Metoda dovoluje diskriminovat biologické skupiny na základě metabolitického profilu a nabízí cesty k dalšímu vývoji kvantitativních postupů.

Reference

Bez uvedených explicitních literárních odkazů v původním textu.