Staying ahead of regulations for the analysis of steroids in urine with GC-MS/MS

Význam tématu

Anti doping kontroly jsou klíčové pro zachování fair play ve sportu a prevenci zneužívání anabolických steroidů. WADA stanovuje minimální požadavky MRPL a MRL pro detekci zakázaných látek v moči. Spolehlivá metoda musí splňovat nároky na citlivost přesnost a robustnost v rutinním provozu akreditovaných laboratoří.

Cíle a přehled studie / článku

Tato technická zpráva demonstruje využití systému Thermo Scientific TRACE 1610 GC a TSQ 9610 GC MS MS pro analýzu steroidů v moči dle nejnovějších požadavků WADA. Studie se zaměřuje na ověření citlivosti na úrovni nových MRPL kalibrační přesnosti nepřítomnosti carry over a dlouhodobé stability měření.

Použitá metodika a instrumentace

• TRACE 1610 GC s iConnect SSL injektorem a LinerGOLD vložkou
• Kolona TraceGOLD TG 5SilMS 30 m 0 25 mm 0 25 µm
• Oven program od 160 °C do 320 °C se čtyřfázovým rampováním
• Carrier gas helium 1 7 mL min s technologií HeSaver H2Safer pro snížení spotřeby plynu
• TSQ 9610 triple kvadrupólový GC MS MS s Advance Electron Ionization zdrojem při 35 eV
• Autosampler AI AS 1610 pro plnou automatizaci injekcí
• Chromeleon CDS verze 7 3 1 s e Workflows pro správu dat zajišťující integritu a traceabilitu

Hlavní výsledky a diskuse

• Citlivost pro sledované steroidy clenbuterol zilpaterol methyltestosteron M1 M2 calusterone M methylstenbolone norbolethone M1 a furazabol dosahovala signál šum vyšší než 3 na úrovni nebo pod úrovní MRPL a výrazně často převyšovala požadavky WADA
• Kvantitativní přesnost podle dvoubodové kalibrace a tří úrovní QC byla v rozmezí ±30 procent kromě mírné nadestimace testosteronu a etiocholanolonu 5B diol v nízké QC kvůli maticovým interferencím
• Test nepřítomnosti carry over potvrzuje nulové zbytkové signály po silně koncentrovaném vzorku
• Robustnost prokázána sekvencí 120 maticových vzorků s QC kontrolami po každých 30 injekcích bez výrazného poklesu citlivosti
• Technologie HeSaver H2Safer umožnila snížení spotřeby helia až 4 5 násobně při zachování chromatografické výkonnosti

Přínosy a praktické využití metody

• Metoda splňuje a často překračuje MRPL a MRL dle WADA což zajišťuje vysokou spolehlivost detekce steroidů v moči
• Automatizace i správa dat v Chromeleon CDS zefektivňuje pracovní postupy a zaručuje auditovatelnost výsledků
• Odolnost vůči carry over a dlouhodobá stabilita snižují potřebu častých údržbových zásahů
• Úspora helia dramaticky snižuje provozní náklady a zajišťuje kontinuální dostupnost nosného plynu

Budoucí trendy a možnosti využití

• Nasazení vysokorozlišující hmotnostní spektrometrie HRMS a SFC MS pro neadresné screeningy a odhalování nových metabolitů
• Využití pokročilých e Workflows a umělé inteligence pro automatizovanou identifikaci neznámých látek a markerů dopingu
• Další úspory provozních nákladů pomocí alterna tivních nosných plynů a vylepšených úsporných technologií
• Integrace on line vzorkovačů a mikrofluidních systémů pro monitorování dopingových látek v reálném čase

Závěr

Systém TRACE 1610 GC ve spojení se TSQ 9610 GC MS MS prokázal vynikající citlivost přesnost robustnost a nepřítomnost carry over při analýze steroidů v moči na úrovni nejnovějších požadavků WADA. Implementace technologie HeSaver H2Safer dále výrazně snižuje spotřebu helia a provozní náklady. Metoda poskytuje akreditovaným laboratořím spolehlivý a efektivní pracovní postup pro anti doping kontroly.

Reference

• World Anti Doping Agency založena 1999 harmonizace předpisů dostupné na www wada ama org
• The 2023 List of Prohibited Substances and Methods World Anti Doping Agency
• WADA Technical Document TD2023IDCR
• WADA International Standard for Laboratories ISL 2021
• Parr MK Botré F Supercritical fluid chromatography mass spectrometry as an emerging technique in doping control analysis Trends in Analytical Chemistry 2022 147 116517
• de Albuquerque CG Rodrigues LM Dos Santos L et al Non target acquisition strategy for screening doping compounds based on GC EI hybrid quadrupole Orbitrap mass spectrometry Drug Test Anal 2018 10 507 517
• Thermo Fisher Scientific Technical Note 001218 Addressing gas conservation challenges when using helium or hydrogen as GC carrier gas
• Thermo Fisher Scientific Helium Saver Calculator