Extend the time window for the detection of low level anabolic‑androgenic steroids and their metabolites

Význam tématu

Detekce anabolicko-androgenních steroidů v trace hladinách v moči je klíčová pro dlouhodobé sledování dopingu u sportovců. Rozšířením časového okna detekce lze odhalit užití nepovolených látek i týdny po aplikaci, což zvyšuje účinnost kontrolních laboratoří a splňuje přísné požadavky Světové antidopingové agentury (WADA).

Cíle a přehled studie / článku

Cílem studie bylo ověřit výkon Agilent 7010 Triple Quadrupole GC/MS systému v dopingové laboratoři v Kreischa (Německo) pro screening a potvrzení nízkých hladin exogenních anabolických steroidů a jejich metabolitů v přítomnosti vysokých koncentrací endogenních markerů.

Použitá metodika

Metoda spočívá v chemicko-fyzikální extrakci moči, následné derivatizaci a chromatografické separaci s proti-směrným vyplachem (backflush) z předkolony. Optimalizací časového profilu elektronové energie byla zamezena saturace signálu endogenních steroidů v chromatografické oblasti 10,2–11,7 minuty. Kompromisem mezi potlačením vysokých signálů (130 eV) a uchováním stability nízkých signálů byla dosažena 10–20 % standardní odpovědi při 70 eV, což významně rozšířilo lineární dynamický rozsah.

Použitá instrumentace

• Agilent 7890 GC s multimode inletem (MMI) a backflush systémem
• Agilent 7010 Triple Quadrupole GC/MS
• Agilent 7993A automatický vzorkovač
• Předkolona 1 m a analytická kolona 10 m × 0,18 mm, 0,18 µm dimethylpolysiloxan
• Nosný plyn helium (0,885 a 1,083 mL/min)
• Injekční objem 0,4 µL, teplota 260 °C, split 15:1
• Transfer line 280 °C, zdroj 230 °C, kvadro 150 °C, ionizace EI (70/130 eV)

Hlavní výsledky a diskuse

• Backflush prodloužil intervaly bez údržby a minimalizoval usazování matrix.
• Detekční limit exogenních steroidů byl snížen na 0,2 pg na kolonu, přičemž vysokokoncentrované endogenní steroidy nebyly saturovány.
• Zvýšení elektronové energie v selektivním okně rozšířilo lineární rozsah až pětinásobně oproti standardnímu 70 eV.
• Metoda splňuje WADA MRPL (0,2–2 ng/mL exogenní, 200–1 000 ng/mL endogenní molekuly) v jednom běhu.
• Dvoufázový screening a potvrzení v softwaru MassHunter zajišťuje spolehlivé výsledky a integraci do LIMS.

Přínosy a praktické využití metody

Protokol umožňuje simultánní měření stopových exogenních metabolitů a vysokokoncentrovaných endogenních markerů v jedné analýze, zvyšuje propustnost laboratoře díky dlouhým bezúdržbovým intervalům a snižuje nároky na čištění iontového zdroje.

Budoucí trendy a možnosti využití

Dalšími směry vývoje jsou rozšíření metodiky na nové skupiny dopingových látek, automatizace přípravy vzorků a integrace s pokročilými datovými platformami pro real-time vyhodnocení výsledků.

Závěr

Agilent 7010 GC/TQ prokázal vysokou citlivost, stabilitu a robustnost při analýze anabolicko-androgenních steroidů v moči. Vyhovuje požadavkům WADA a poskytuje laboratořím efektivní nástroj pro dlouhodobé dopovací kontroly.

Reference

1. D. Thieme, C. Rautenberg, J. Grosse, M. Schoenfelder. Significant increase of salivary testosterone levels after single therapeutic transdermal administration of testosterone: suitability as a potential screening parameter in doping control. Drug Test. Anal. 2013, 5, 819.
2. WADA. Technical Document TD2017MRPL. 17 October 2017.
3. WADA. Technical Document TD2016EAAS. 17 October 2017.
4. J. Jakobsson et al. Large differences in testosterone excretion in Korean and Swedish men is strongly associated with an UDP-glucuronosyl transferase 2B17 polymorphism. J. Clin. Endocrinol. Metab. 2006, 91, 687.