A Sensitive and Reliable Method for Anabolic Agents in Human Urine on the Agilent 7000 Triple Quadrupole GC/MS

Význam tématu

Detekce anabolických látek v biologických vzorcích je klíčová pro zajištění férového sportovního prostředí a ochranu zdraví sportovců. Anabolické látky představují analytickou výzvu kvůli nízkým koncentracím v moči, různorodému metabolickému profilu a rušivému matričnímu pozadí.

Cíle a přehled studie / článku

Cílem bylo vyvinout citlivou a spolehlivou screeningovou metodu pro sedm vybraných anabolických látek a jejich metabolitů dle požadavků WADA (MRPL), aplikovat ji na reálné vzorky ze XVI PanAmerican Games (1367 vzorků) a prokázat její robustnost během rozsáhlé série analýz.

Použitá metodika a instrumentace

Mimo jiné byly sledovány tyto kroky a nástroje:

• Příprava vzorku: přidání fosfátového pufru, enzymatická hydrolýza β-glukuronidázou (55 °C, 1 h), úprava pH na 9,5, extrakce tert-butylmethyléterem, odpaření, derivatizace MSTFA-NH4I-ethantiol (60 °C, 30 min).
• Instrumentace: Agilent 7890 GC (split 1:10, kolona HP-Ultra 1 inert 25 m×0,2 mm×0,11 µm), Agilent 7000 GC/TQ MS v režimu SRM (N2 kolizní plyn 1,5 mL/min, He quench 2,25 mL/min, zdroj 220 °C, kvadrupól 180 °C).
• Optimalizace SRM podmínek: výběr prekurzorových/prouduktových iontů a kolizních energií na základě poměru signál/šum, sledování dvou tranzicí pro každou látku.

Hlavní výsledky a diskuse

Metoda dosahovala požadované citlivosti (MRPL 2–10 ng/mL) a opakovatelnosti (RSD 4,9–13,4 %) pro všechny cílené látky. Při analýze 82 analytických sérií zůstaly poměry ploch SRM tranzicí stabilní (RSD < 7 %) a signál/šum charakteristických tranzicí vykazoval konstantní úroveň po více než 1300 vzorcích.

Přínosy a praktické využití metody

• Rychlý screening (< 7,5 min) pro velký počet vzorků.
• Vyšší selektivita a citlivost oproti jednorozměrným GC/MS a konvenčním LC/MS/MS metodám.
• Robustnost pro rutinní kontrolní laboratoře akreditované WADA.

Budoucí trendy a možnosti využití

Rozšíření počtu cílených sloučenin, integrace s LC/TQ MS pro pokrytí širšího spektra dopingu, automatizace vzorkové přípravy a využití pokročilých datových analýz pro zlepšení identifikace a kvantifikace nízkokoncentrovaných metabolitů.

Závěr

Vyvinutá GC/TQ MS metoda splňuje WADA MRPL požadavky a prokázala vysokou citlivost i robustnost při analýze reálných vzorků. Agilent 7000 Series GC/TQ MS se jeví jako efektivní nástroj pro rutinní dopingové kontroly.

Reference

1. M.A. Delgadillo et al. Sensitive and robust method for anabolic agents in human urine by gas chromatography–triple quadrupole mass spectrometry. J. Chromatogr. B, 2012.
2. WADA. The 2011 Prohibited List. International Standard.
3. WADA. TD2010MRPL. Minimum Required Performance Limits.
4. S. Baumann. Longterm Detection of Anabolic Steroid Metabolites in Urine. Agilent Technologies Application Note, 2010.
5. P. Van Eenoo et al. A fast, comprehensive screening method for doping agents in urine by GC–TQ MS. J. Chromatogr. A, 2011.
6. ICH Topic Q2B. Validation of Analytical Procedures: Methodology. ICH: Geneva, 1996.