Sherlock Equipment and Consumables List Traditional Extraction Methods

Význam tématu

Správná příprava vzorků a zajištění kvality všech reagencií, spotřebního materiálu a přístrojového vybavení je klíčová pro spolehlivou identifikaci mikroorganismů metodou Sherlock MIS. Bez detailního seznamu a specifikace materiálů hrozí omezená reprodukovatelnost výsledků a riziko chybné klasifikace.

Cíle a přehled dokumentu

Dokument poskytuje úplný přehled spotřebního materiálu, reagencií, přístrojů a plynových konzerv dodávaných v USA, potřebných pro provoz Sherlock Microbial Identification System pomocí tradiční 90minutové extrakční techniky. Uživatelům usnadňuje správné objednání a přípravu laboratoře.

Použitá metodika

Postup vychází z osvědčené metody methylesterifikace buněčných lipidů. Klíčové kroky:

• Směs hydroxidu sodného a methanolu pro alkalickou hydrolyzu lipidů.
• Extrakce MKETE (fatty acid methyl esters) hexanem/MTBE.
• Kyselá neutralizace pomocí HCl.
• Oddělení fází a příprava vzorku do GC autosampler lahviček.

Použitá instrumentace

• Digitální vortex mixer
• Tube revolver (otáčení 360° při ≥ 8 rpm) s pádly
• Dva digitální vodní lázně (vroucí a 80 °C)
• GC autosampler vials a certifikované kolony pro Agilent GC (modely 6850, 6890, 7820, 7890)
• Plynové generátory nebo zásobníky: vodík, dusík, sušený průmyslový vzduch
• Fyzikální vybavení: laboratorní odsavač, kontejnery pro likvidaci roztoků.

Hlavní výsledky a diskuse

Seznam reagencií (NaOH, MeOH, hexany, MTBE, HCl) a spotřebního materiálu (pipetovací přístroje, lahvičky, septa) je kompletovaný s doporučenými výrobci a kódy. Zdůrazněny jsou položky bez náhrady (označené hvězdičkou). Popsány jsou požadavky na kvalitu plynů a růstových médií pro environmentální a klinickou mikroflóru.

Přínosy a praktické využití metody

Metoda zaručuje vysokou opakovatelnost a přesnost mikrobiální identifikace založené na profilování MKETE. Standardizovaný seznam materiálů usnadňuje akreditaci laboratoře a minimalizuje ztráty času při shánění náhrad.

Budoucí trendy a možnosti využití

• Automatizace extrakčního workflow pro škálování analýz.
• Minimalizace spotřeby organických rozpouštědel s ohledem na ekologii a náklady.
• Integrace inline plynárenských generátorů a monitorování čistoty plynu.
• Vývoj rychlejších extrakčních protokolů s použitím mikrovlnného nebo ultrazvukového ohřevu.

Závěr

Detailní seznam materiálů a přístrojů je základem pro konzistentní provoz Sherlock MIS metodologie. Dodržení specifikací jednotlivých položek výrazně zvyšuje kvalitu a spolehlivost mikrobiální identifikace.

Reference

• MIDI, Inc.: Sherlock Microbial Identification System Operating Manual, Appendix B
• Fisher Scientific, Thermo Scientific, Restek – katalogové listy reagencií a spotřebního materiálu
• Parker Balston – specifikace plynárenských generátorů