<a href="https://gcms.cz/article/972">V první části příspěvku o chvostování píků</a> jsme si řekli trošku teorie a podívali se, kdy dochází k tomuto jevu a co je jeho příčinou. V závěru jsme otevřeli téma turbulentního proudění kolonou, které je způsobeno primárně chybnou instalací GC kolony jako její seříznutí, správná délka v části injektoru a detektoru nebo těsnost tohoto spoje.
Turbulentní proudění průtoku vzorku kolonou můžeme nechtěně způsobit i nešikovným seříznutím kolony. Vliv na povahu proudění mají dále netěsnosti systému stejně jako obstrukce neboli překážky v proudění mobilní fáze. Příkladem obstrukci působících nečistot mohou být odštěpky septa, které se s rostoucím počtem nástřiků zákonitě dostávají do systému, nánosy netěkavých sloučenin ve skelné vatě lineru a podobně. 
Metaforicky lze nežádoucí jev turbulentního proudění přirovnat k vlivu kamene umístěného v rovnoměrném proudu vody horské říčky. Bezprostředně za kamenem vzniká turbulentní zpětný protiproud. Podobně bude pozměněn průtok nosného plynu a vzorku bezprostředně za jakoukoliv mechanickou nečistotou v GC koloně.
Někdy mohou být chvostující píky způsobeny nežádoucími polárními interakcemi mezi rozpouštědlem, rozpuštěnými látkami a stacionární fází kolony. Vždy pamatujte, že vodná rozpouštědla se nemísí s lipofilními látkami a naopak. Pokud je tedy pro vás problémem najít pro vzorek vhodné, v tomto směru optimální rozpouštědlo, pravděpodobně na následném chromatogramu uvidíte chvostující píky. Použité rozpouštědlo, vzorek i stacionární fáze kolony by si měly být látky blízké povahou své rozpustnosti ve vodě či v tucích. Chvostování píků bývá často projevem nesourodosti metody ve vlastnostech těchto látek. Optimalizovat shodu můžeme pochopitelně pouze změnou kolony a její stacionární fáze, nebo změnou rozpouštědla. Většina analytiků pak v tento moment raději strpí pokřivené píky, než aby zasahovali do parametrů metody.
V případě, že pozorujete chvostující nebo zkreslené píky pouze u látek s retenčními časy blízkými rozpouštědlu nebo píku hlavního analytu směsi, jedná se o reverzní efekt rozpouštědla. Látky eluující se v blízkosti rozpouštědla podléhají totiž při separaci nejen afinitě stacionární fáze, ale i afinitě rozpouštědla a jejich setrvávání na stacionární fázi tudíž není dostatečné pro optimální tvar a rozlišení píků. Tento jev si lze představit i jako jakousi soutěž mezi stacionární fázi a rozpouštědlem o vazbu s daným analytem. Ideální prevencí reverzního efektu rozpouštědla je použití 3 až 5 metrů dlouhé, deaktivované křemíkové předkolony.
Ve videu výše můžete ve zkrácené délce vidět příklad takové předkolony. Její vliv na eliminaci reverzního efektu rozpouštědla můžete vidět na obrázku.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_hromatogram_vlevo_znazornuje_separaci_na_GC_systemu_bez_zapojeni_predkolony_retencniho_gapu_2_f7ab0c9605/HPST-hromatogram-vlevo-znazornuje-separaci-na-GC-systemu-bez-zapojeni-predkolony-retencniho-gapu-2..png" alt="HPST: Chromatogram vlevo znázorňuje separaci na GC systému bez zapojení předkolony/retenčního gapu. Chromatograf vpravo znázorňuje ten samý nástřik do systému se zařazenou předkolonou. U analytů 1,2 a 3 lze vpravo pozorovat výrazné zlepšení rozlišení a tvaru píků vlivem předkolony."/>
Pokud při splitless či on-column nástřiku pozorujete jev chvostujících píků snižující se se stoupajícím retenčním časem analytů, jedná se o přetrvávající reverzní efekt rozpouštědla. K nápravě tohoto jevu dopomůže snížení teploty kolony na počátku nástřiku, čímž zvýšíte fokusaci rozpouštědla. Obvykle se teplota v této souvislosti snižuje o 10 až 20 °C pod bod varu rozpouštědla. Na obrázku vidíte rozdíl v separaci a tvaru píků při fokusaci hexanu nastavením počáteční teploty kolony na 50 °C (teplota varu hexanu 68-69 °C).
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_Na_obrazku_vidite_rozdil_v_separaci_a_tvaru_piku_pri_fokusaci_hexanu_nastavenim_pocatecni_teploty_kolony_na_50_C_teplota_varu_hexanu_68_69_C_7fa71f9dd7/HPST-Na-obrazku-vidite-rozdil-v-separaci-a-tvaru-piku-pri-fokusaci-hexanu-nastavenim-pocatecni-teploty-kolony-na-50-C-(teplota-varu-hexanu-68-69-C)..jpg" alt="HPST: Vliv teploty nástřiku na fokusaci rozpouštědla v plynové chromatografii."/>
Při počáteční teplotě kolony 70 °C je fokusační efekt zanedbatelný (vlevo), zatímco po snížení teploty na 50 °C dojde k znatelnému zúžení prostoru kondenzace rozpouštědla na počátku kolony – fokusaci, a tím i ke zlepšení tvaru píků ostatních analytů (vpravo).
Při splitovaném nástřiku se snažte docílit minimálního průtoku nosného plynu inletem 20 ml/min, lépe pak alespoň 30 ml/min. Nižší rychlosti proudu nosného plynu budou opět přispívat k chvostování píků, jak ukazuje následující obrázek.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_Vliv_prutoku_nosneho_plynu_pri_Split_nastriku_v_plynove_chromatografii_231433e377/HPST-Vliv-prutoku-nosneho-plynu-pri-Split-nastriku-v-plynove-chromatografii..jpg" alt="HPST: Vliv průtoku nosného plynu při Split nástřiku v plynové chromatografii."/>
Povšimněte si chvostování prvních dvou píků. Splitovací poměr během tohoto nástřiku byl poměrně nízký (5:1) a průtok nosného plynu inletem následně již nebyl dostatečný, aby zajistil potřebně rychlý vstup většího objemu vzorku na kolonu. Zde byl průtok kolonou 1 ml/min. Při splitovacím poměru 5:1 se tak se započtením průtoku oplachu septa (3 ml/min) dostáváme na celkový průtok inletem pouhých 10 ml/min, což je příliš málo pro dostatečně rychlý proces vstupu vzorku na kolonu. 
Část těkavějších analytů tak již začíná procházet kolonou v momentě, kdy jejich úplný objem ještě zcela nestihl vstoupit na stacionární fázi kolony. Píky právě těchto složek následně na chromatogramu chvostují. Méně těkavé složky, později eluující analyty, které se kolonou pohybují pomaleji, tento jev nepostihne, protože mají vyšší bod varu a vstupují na kolonu jednotně i za vyšších počátečních teplot gradientu metody.
Pomoci si v tomto případě můžete zvýšením splitovacího poměru a tím pádem zmenšením objemu vzorku vstupujícího na kolonu. Samozřejmě tak můžete učinit pouze pokud víte, že další zředění vzorku následně neohrozí citlivost detekce analytů nižších koncentrací. Efekt zvýšení splitovacího poměru ukazuje obrázek níže.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_Vliv_zvyseni_splitovaciho_pomeru_pri_nastriku_v_plynove_chromatografii_f75dbf4569/HPST-Vliv-zvyseni-splitovaciho-pomeru-pri-nastriku-v-plynove-chromatografii..jpg" alt="HPST: Vliv zvýšení splitovacího poměru při nástřiku v plynové chromatografii."/>
<h3>Příčiny chvostování píků a jejich řešení:</h3>
<ol>
<li>Znečištění prostoru inletu</li>
</ol>
<ul>
<li>Proveďte základní údržbu inletu. Vyměňte liner, o-těsnění, septum, pokud je třeba, tak i zlaté těsnění.</li>
</ul>
<ol start="2">
<li>Příliš špinavé vzorky</li>
</ol>
<ul>
<li>Zvažte změnu přípravy vzorku, případně začleňte další kroky, například filtraci vzorku, aby se problém neobjevil znovu.</li>
</ul>
<ol start="3">
<li>Zanesení počátku kolony netěkavými látkami, nečistotami</li>
</ol>
<ul>
<li>Seřízněte kolonu. Zkrácení kolony většinou tento problém vyřeší.</li>
</ul>
<ol start="4">
<li>Přítomnost mechanické překážky toku mobilní fáze</li>
</ol>
<ul>
<li>Pakliže nic z předešlého nepomohlo, otestujte kolonu na přítomnost mechanické překážky průtoku nástřikem hexanu nebo butanu. Tyto látky by při plynulém průtoku neměly jevit jakékoliv deformace píků.</li>
</ul>
<ol start="5">
<li>Špatně nainstalovaná kolona</li>
</ol>
<ul>
<li>Uvolněte kolonu z inletu a detektoru a pečlivě ji opětovně připojte znovu zpět.</li>
</ul>
<ol start="6">
<li>Nekompatibilní hydrofilita/lipofilita rozpouštědla, vzorku a stacionární fáze.</li>
</ol>
<ul>
<li>vyzkoušejte jiné rozpouštědlo, jiný typ kolony.</li>
</ul>
<ol start="7">
<li>Chvostují píky vysoce těkavých analytů v blízkosti píku rozpouštědla</li>
</ol>
<ul>
<li>Nainstalujte 3 až 5 metrů dlouhou deaktivovanou křemíkovou předkolonu.</li>
</ul>
<ol start="8">
<li>Při metodě využívající on-column či splitless nástřiku se jev chvostování objevuje u všech analytů a klesá se stoupajícím retenčním časem sloučeniny</li>
</ol>
<ul>
<li>Uvažujte vliv přetrvávajícího reverzního efektu rozpouštědla. Snižte počáteční teplotu metody na 10 - 20 °C pod teplotu bodu varu rozpouštědla.</li>
</ul>
<ol start="9">
<li>Problém se objevuje u těkavých, brzy eluujících analytů během splitovaného nástřiku</li>
</ol>
<ul>
<li>Zkontrolujte, zda nemáte příliš malý splitovací poměr, tudíž na daný průtok inletem příliš velký objem vzorku vstupujícího na kolonu.</li>
</ul>
<h3>Nepřehlédněte</h3>
Přehled videí věnující se údržbě Vašeho GC (instalace GC kolony, výměna lineru, septa, splitovacího trapu a zlatého těsnění) od Agilent Technologies naleznete v článku <a href="https://gcms.cz/article/873">Údržba Vašeho GC - série videí od Agilent Technologies</a>

Údržba Vašeho GC. Chvostující píky (2. část)

Představujeme video průvodce instalací kapilárních GC kolon. Tento postup bude vhodný pro většinu kapilárních <a href="https://www.labicom.cz/produkty/spotrebni-material/plynova-chromatografie-prislusenstvi/gc-kolony-predkolony/agilent">kolon</a>, které Agilent vyrábí (více o kolonách i v článku <a href="https://hpst.cz/agilent-gc-kolony-ultra-inert-wax-intuvo">Agilent GC kolony - Ultra Inert, Wax, Intuvo</a>) Pro vaší novou GC kolonu však mohou platit specifické instalační postupy, čí nestandardní péče a údržba. Určitě si proto vždy přečtěte všechny informace, které dorazí spolu s novou kolonou.
K výměně kolony budete potřebovat hned několik pomůcek. Bude třeba nějaký nástroj pro řezání kolon. Příkladem je keramická žiletka. V dnešní době se vzhledem ke své praktičnosti stává téměř standardem a ostatní alternativy skoro vymizely. Je dobré mít po ruce lupu, abyste zkontrolovali průřez kolonou. Pokud používáte FID detektor, může se vám hodit mít zásobu nějaké kolonou nezadržované sloučeniny, jako například metanu nebo butanu. Pro MS můžete použít argon. Je dobré mít po ruce také <a href="https://www.labicom.cz/produkty/spotrebni-material/plynova-chromatografie-prislusenstvi/prutokomery-rotametry-detektory-netesnosti">elektronický průtokoměr</a> a detektor netěsností. Můžete mít připravenou i testovací směs k separaci po dokončení instalace kolony, ale není to nutné, protože každá Agilent kolona je před odesláním klientům předem otestována, takže vy už máte automaticky jistotu, že vše bude fungovat podle očekávání, a to okamžitě po vybalení z krabice. Dobré je si připravit i jeden ze svých standardů, abyste si mohli posléze ověřit, že je vše správně nainstalováno a správně nastaveno. Samozřejmě se budou hodit ochranné brýle a mnozí rádi používají i rukavice při manipulaci s kolonou.
Použití rukavic bývá často předmětem diskuse. Stačí zajistit, aby se nic nedostalo do kontaktu s koncem kolony, který bude po instalaci součástí cesty vzorku. Tyto nečistoty by pak vycházely ze systému během analýz. Jakékoliv nečistoty se z kolony zdlouhavě vymývají, ale obzvlášť houževnaté jsou oleje. Určitě byste na chromatogramu neradi vídali svůj oběd, jak je ukázáno ve videu, jak například vypadá chromatogram smažené hranolky. Analytik držel hranolku 5 vteřin a následně si otřel ruce, aby odstranil co možná nejvíce mastnoty. Následně se lehce dotknul konce kolony nad ferulkou, upevnil do inletu a hleďme… Smažená hranolka! 
I olejové nečistoty se ze systému po čase dostanou, ale lépe je tam vůbec v první řadě nezanést. Znamená to, že je potřeba používat rukavice? Rozhodně ne, jen je třeba se před instalací ujistit, že máte čisté ruce. Ovšem i „čistota“ může být problém. Ve videu můžete vidět chromatogram tekutého mýdla po podobném experimentu. Pamatujte, že stačí opravdu málo. Rukavice nejsou nezbytné a pokud vám vyvstane podobný problém, jako výše popsané, vezměte čistý laboratorní hadřík, namočte do acetonu nebo metanolu a konec kolony před upevněním očistěte. Pokud vás podobný chromatogram nevyděsí, nedělejte si s tím starosti.
Než se pustíte do instalace, je dobré zkontrolovat trapy na vychytávání nečistot v nosném plynu, zda nejsou prošlé/nasycené a pokud je třeba, vyměnit je. Ve videu je ukázána práce na novém stroji čili naše trapy jsou čerstvé. Protože máte z důvodu výměny kolony vše vypnuté, je vhodná doba zkontrolovat i veškeré <a href="https://www.labicom.cz/produkty/spotrebni-material/plynova-chromatografie-prislusenstvi/gc-kolony-predkolony/agilent">spotřební díly</a> inletu. Vyměňte septum, zkontrolujte liner, zda není viditelně špinavý a nepotřebuje vyměnit. Často je třeba výměny, aniž by nečistoty byly vidět, protože již nepatrný záchyt může narušit inertnost inletu. Projevem takového znečištění bývá pokles odezvy obecně, nebo chvostování píků aktivních sloučenin (více o chvostování píků v článcích <a href="https://hpst.cz/udrzba-vaseho-gc-chvostujici-piky">Údržba Vašeho GC. Chvostující píky</a> a <a href="https://hpst.cz/udrzba-vaseho-gc-chvostujici-piky-2-cast">Údržba Vašeho GC. Chvostující píky (2. část)</a> Pokud vyměňujete liner, ujistěte se, že jste nasadili i nový O-kroužek. O-kroužky stárnou a ztrácejí s časem elasticitu, což snižuje jejich těsnící vlastnosti. Pokud máte špinavý, či poškozený liner, je pravděpodobné, že stacionární fáze v úvodní části kolony je v podobném stavu. Kolony s kapalnou stacionární fází mohou být při vyšší než pokojové teplotě snadno poškozeny přítomností kyslíku. Proto se po instalaci ujistěte, že nikde není netěsnost. Agilent doporučuje využívání trapy jako zvýšení ochrany proti nečistotám vstupujícím do systému, čímž prodlužujete životnost kolon a minimalizujete šum na pozadí. Při zkracování kolon musíme být opatrní, protože jsou ze skla. Ochranné brýle jsou povinností.
Prvně zavěsíme kolonu do pece chromatografu na závěsný držák tak, aby se v žádné své části nedotýkala stěny pece. Nyní potřebujeme odmotat dostatečný kus kolony tak, abychom si vytvořili lehce zaoblenou část vedoucí do inletu. Vyhněte se ostrým ohybům, které by napínaly kapiláru a mohly by způsobit až její zlomení. Ujistěte se, že se kolona nedotýká žádných ostrých hran. Dále vyměňte matičku s ferulkou na jedné straně kolony. My na kolonu rádi nejprve napíchneme septum, protože to nám následně pomůže v odměřování délky konce. Konce kolony nejsou nijak odlišené, nicméně většina analytiků instaluje kolonu tak, že závěsný držák je otevřený směrem ke dveřím pece.
Konec kolony seřezáváme poté, co jsme umístili matičku s ferulkou, aby nám na konci kolony nezůstal žádný odštěpek z ferulky. Koncovku kolony držte tímto způsobem. Když přejedete prsty po hraně keramické žiletky, zjistíte, že má hladkou a hrubou hranu. Kolonu budete řezat její hladkou hranou. Jedním pohybem přetáhněte žiletku v lehkém úhlu přes hranu kolony. Neměli byste tlačit natolik, aby se kolona zlomila, ale pouze tak, abyste narušili vnější polyamidovou vrstvu a nařízli skleněnou kapiláru pod ní. Uchopte kolonu na obou stranách řezu a ohněte ji směrem od naříznuté strany. Někdy stačí do odříznutého konce kolony pouze klepnout a část se sama oddělí. Zkontrolujte povrch řezu kolonou pomocí lupy. Ujistěte se, že řez je v pravém úhlu ke kapiláře a že na něm nejsou žádné odštěpky, hrbolky, nerovnosti. Pokud není hladký, opakujte znovu.
Optimální délka kolony, která se vsunuje do prostoru inletuje u většiny instalací do S/SL inletu 4-6 mm od kraje ferulky ke špičce kolony. Tato vzdálenost se může pro některé speciální linery lišit. Chceme docílit, aby se špička kolony nacházela těsně nad povrchem zlatého těsnění. Trochu výše je v pořádku, příliš nízko může být problém. Po odměření délky je vhodná chvíle k omytí konce kolony hadříkem navlhčeným v acetonu či metanolu, jak bylo zmíněno dříve. Pokud zavádíte kolonu do jiného než S/SL inletu, ověřte vhodnou délku jejího konce a postup v instalačním manuálu. Jakmile je kolona v patřičné pozici, utáhněte ručně matičku s ferulkou. Poslední půlotáčku dotáhněte pomocí klíče. Pokud lze v závitu s kolonou stále hýbat, utáhněte o další čtvrtotáčku. Nedotažení kolony a ponechání netěsnícího spoje povede k okamžitému a nevratnému poškození kolony v momentě ohřevu. V momentě dotahování s kolonou nehýbejte. V minulosti se k označení délky koncovky kolony používal tekutý papír, raději používáme septum, které nám zároveň zajistí ferulku s matičkou v přesné pozici. Septum nezapomeňte na kolonu nasadit ještě před matičkou a ferulkou, čímž docílíte tohoto elegantního a jednoduchého řešení.
Ferulky, obzvláště ty grafitové, mění po zahřátí lehce tvar. Pokud jste kolonu instalovali do chladného inletu a detektoru, po zahřátí spoje dotáhněte. Součástí optimální praxe je zkontrolovat spoje i po kondicionaci kolony, abyste si mohli být opravdu jistí, že vše těsní. Upravte vstupní tlak na čele kolony tak, abyste získali rozumný průtok nosného plynu. Nastavení se může lišit v závislosti na parametrech kolony a použitém nosném plynu. Například pro 30m kolonu s heliem jako nosným plynem bude vstupní tlak čela kolony někde mezi 50 a 25 psi pro kolony s vnitřním průměrem 0.25 mm. Tyto hodnoty jsou pouze doporučenými počátečními hodnotami. Konečný vstupní tlak bude samozřejmě záviset na požadovaném průtoku nosného plynu ve vaší metodě…
Více v příštím článku Instalace a výměna GC kolon (2. část).
Pro další informace se obracejte na produktového specialistu Daniela Sandera (daniel.sander@hpst.cz).

GC kolony - instalace a výměna (1. část)

Pokračování článku <a href="https://gcms.cz/article/1563">GC kolony - instalace a výměna (1. část)</a>…
Dále položíme volný konec kolony (detektorový konec) do malé vialky s vodou, hexanem nebo jiným vhodným rozpouštědlem a měli bychom pozorovat rovnoměrný proud bublinek. Pokud nevidíte bublinky, bude třeba zkontrolovat zdroj nosného plynu, průtok plynu inletem a další nastavení GC, zda někde nedochází k úniku. Jakmile vidíte bublinky, vše je v pořádku. Po kontrole opět očistíme konec kolony od zbytků rozpouštědla acetonem či metanolem napuštěným hadříkem.
Jako nosný plyn doporučujeme používat vysoce čistý vodík nebo helium. Dříve se často používal i dusík, ale u většiny aplikací se v poslední době již nedoporučuje. Ať už používáte kterýkoliv nosný plyn, doporučujeme minimální čistotu 99,995 %. Nejčastější nečistotou bývá kyslík a jeho přítomnosti je třeba se vyhnout. V nosném plynu by ho mělo být méně než 1 ppm, neboť může při zahřátí ničit kolony systému.
Při nainstalování kolony do detektoru budeme postupovat stejně, jako tomu bylo v případě inletové strany. Na konci kolony už máme nasunuté septum, matičku i ferulku, kolonu jsme seříznuli čistým řezem a nyní konec jednoduše jen zasuneme do detektoru. Na doraz a pak malinko povytáhnout.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_Instalace_GC_kolony_mereni_spravne_vzdalenosti_f7d2e76d6f/HPST-Instalace-GC-kolony-mereni-spravne-vzdalenosti.png" alt="HPST: Instalace GC kolony - meření správné vzdálenosti"/>
Měli bychom také zkontrolovat, zda vše těsní. K tomu můžete použít elektronický detektor netěsností. Zkontrolujte oba body propojení, jak prostor na vstupu do inletu, tak prostor na vstupu do detektoru. Elektronická kontrola tlaku umožňuje snižovat či zvyšovat lineární rychlost nebo průtok nosného plynu systémem. Je stěžejní, abyste do softwaru na počítači (<a href="https://gcms.cz/products/24">OpenLab</a>), nebo pomocí GC klávesnice či dotykového displeje zadali správné parametry kolony, aby bylo možné následně nastavit odpovídající hodnoty rychlosti a průtoku nosného plynu. Vždy se podívejte do souhrnného přehledu vlastností kolony, který bývá součástí balení, abyste zadali přesnou hodnotu vnitřního průměru kolony.
Nyní přichází vhodná chvíle pro nástřik vaší testovací směsi, nebo kontrolního standardu pro ověření nastavení GC. Tento vzorek obsahuje látku nebo více látek o známých retenčních časech, které nám následně ověří, že nastavení GC je správné. Samozřejmě očekáváme i ostré píky, které jsou pak dalším potvrzením úspěšné instalace kolony.
Lineární rychlost nosného plynu můžeme ověřit nástřikem látky, která není na koloně zadržována. Začneme s nastavením teploty pece na přibližně 35 až 40 °C. Nyní provedeme nástřik 1 až 2 μl nezadržované látky při nastavení S/SL inletu do módu split. Pokud máte na GC pouze megabore direct, on-column, nebo splitless injektor, které vám neumožňují splitovat zplyňený objem vzorku v inletu, zřeďte vzorek před nástřikem o něco více, aby vám nezahltil detektor. Většina laboratoří k tomuto účelu využívá metan, ale dobrým trikem, který se také vidí často, je butanový zapalovač na cigarety. Je snadno dostupný a vše, co potřebujete, je přece pouze trocha plynu. Dejte pozor, abyste při natahování do jehly neškrtnuli a natáhněte 1 či 2 μL. Následně nastříkněte do inletu, spusťte GC analýzu a na chromatogramu hledejte velmi ostrý, symetrický pík. Při splitless nástřiku můžeme pozorovat mírný jev chvostování píku. Pokud se na chromatogramu neobjeví žádný pík, je možné, že nosný plyn neprotéká systémem. Zkontrolujte regulátory průtoku, zdroj nosného plynu a ovladače průtoku, zda je vše patřičně nastaveno. Ujistěte se, že správně pracuje detektor, záznam signálu i jehla stříkačky. Pokud vám kolonou nezadržovaná látka chvostuje, je možné že dochází k úniku nosného plynu v prostoru inletu, špatně jste připojili kolonu, nebo nastavili příliš nízký splitovací poměr. Přeinstalujte kolonu, zkontrolujte nastavení a zkontrolujte také inlet na netěsnosti. Než budete pokračovat, potřebujete zaznamenat symetrický pík.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_Nastrik_nezadrzovane_latky_pro_kontrolu_cesty_vzorku_0bf5f0f858/HPST-Nastrik-nezadrzovane-latky-pro-kontrolu-cesty-vzorku.png" alt="HPST: Nástřik nezadržované látky pro kontrolu cesty vzorku"/>
Nyní kondicionujeme kolonu. Zahřátím kolony bez průtoku nosného plynu nebo za přítomnosti kyslíku v nosném plynu kolonu zničíme. Nejprve se ujistěte, že veškerý kyslík byl z kolony vytlačen. Za tímto účelem kolonu proplachujte zhruba 15 minut nosným plynem. Následně kolonu zahřejte na její horní teplotní limit, nebo 10 až 20 °C nad nejvyšší operační teplotu vámi používané metody. Z těchto dvou možností vyberte nižší variantu maxima. Nepřekračujte maximální teplotní limit kolony, jinak jí poškodíte. Rychlost ohřevu není stěžejní, ale absence kyslíku a plně těsnící systém jsou nutností. Během kondicionace kolony pozorujte baseline. Můžete vidět určité artefakty, píky nečistot zanesených během instalačního procesu, ale tyto by neměly v systému přetrvávat. Po tom, co kolona dosáhne kondicionační teploty, sledujte chování baseline. Pokud roste spolu s rostoucí teplotou systému, opět zkontrolujte systém na netěsnosti. Pokud vyroste a vrátí se na základní úroveň, možná jste právě vymyli nějakou nečistotu o vysoké molekulové hmotnosti, která se do kolony dostala během instalace. Ideální odezvou je plochá baseline. Této odezvy byste měli dosáhnout poměrně brzy, v závislosti na kondici instrumentu, ve které se nacházel v momentě instalace. Můžete být hotovi do 15 minut, ale někdy vše trvá třeba až 60 minut od momentu dosažení kondicionační teploty. Pokud se baseline neustálí do 2 až 3 hodin a není konstantní, ukončete kondicionaci. Nestabilní baseline může být důsledkem netěsnosti kdekoliv na trase nosného plynu, nejen v prostoru inletu a může být také zapříčiněna kontaminací systému. Nejlepším řešením, než budete pokračovat, je pochopitelně zchladit systém a najít a odstranit příčinu.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_Baseline_a_sum_69d3969804/HPST-Baseline-a-sum.png" alt="HPST: Baseline a šum"/>
Polární stacionární fáze a kolony o větších průměrech (tzv. wide bore) obvykle vyžadují delší stabilizační časy než kolony s menším průměrem (tzv. narrow bore) a nepolární stacionární fáze. PLOT kolony (porous layer open tubular) vyžadují speciální kondicionační procedury. U těchto kolon opět vždy postupujte podle souhrnného přehledu vlastností kolony. Zde byste vždy měli najít vhodný postup.
Co se týká <a href="https://gcms.cz/products?manufacturerItems=10&amp;category=1">Plynových chromatogafů s ECD detektorem</a> a <a href="https://gcms.cz/products?manufacturerItems=10&amp;category=5">hmotnostních (MS) detektorů</a>, někteří analytici mají za to, že ke kondicionaci kolony dojde rychleji když kolona během procesu není připojena k detektoru. Tímto postupem se však nedozvíte nic o stabilitě baseline, nebo netěsnostech systému. Pokud budete kondicionovat kolonu při netěsnosti v systému, způsobíte její nevratné poškození, které povede k vysoké krvácivosti stacionární fáze nebo k jejímu aktivování a následné ztrátě inertnosti. Pokud je kolona kondicionována, přičemž detektorový konec je odpojen, doporučujeme konec následně zkrátit, protože mohlo dojít k jeho poškození. Odstřihněte 10 až 20 cm volného konce kolony, než jej připojíte do detektoru.
U kapilárních GC kolon je průměrná lineární rychlost mnohem spolehlivějším a lepším měřítkem pohybu nosného plynu než objemový průtok. Rychlost hovoří pouze o rychlosti plynu, takže nepotřebujeme znát vnitřní objem kolony nebo její vnitřní průměr. Viskozita nosného plynu je závislá na teplotě prostředí, a proto při různých teplotách potřebujete různé tlaky, abyste dosáhli stejné průměrné lineární rychlosti nosného plynu. Proto nastavujte průměrnou lineární rychlost nosného plynu dané analýzy vždy při stejné teplotě. Touto teplotou pak většinou bývá počáteční teplota pece. Pokud chcete, můžete si průměrnou lineární rychlost vypočítat sami při nástřiku 1 až 2 μL kolonou nezadržované látky, jak jsme nastínili dříve, s následným vsazením retenčního času píku do následující rovnice. Vstupní tlak upravujte tak dlouho, dokud nedostanete patřičnou průměrnou lineární rychlost nosného plynu. U <a href="https://www.hpst.cz/plynova-chromatografie/plynove-chromatografy">plynových chromatografů s elektronickou kontrolou tlaku</a> můžete lineární rychlost nosného plynu zadat na počítači nebo přímo na klávesnici/displeji chromatografu. Jak jsme zmínili dříve, musí být zadány správné hodnoty a rozměry. Rozměry opět hledejte v souhrnném přehledu vlastností kolony, abyste měli jistotu jejich správnosti. Délku můžete odhadnout spočítáním smyček kolony na držáku a vynásobením délkou 0.54m u standardních kolon nebo násobením délkou 0.4m u kolon s 5 palcovými držáky. Pro další detaily kontaktuje technickou podporu Agilent, nebo <a href="https://www.hpst.cz/servis">servisní oddělení vašeho distributora</a>.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_Chromatogram_slepeho_blank_nastriku_v_case_086fbd0df7/HPST-Chromatogram-slepeho-blank-nastriku-v-case.png" alt="HPST: Chromatogram slepého - blank nástřiku v čase"/>
Vždy je dobré vědět, jak vypadá váš systém bez přítomnosti vzorku, nebo během slepého nástřiku. Tato informace se vám bude hodit později v momentě, kdy budete hledat příčinu jakýchkoliv obtíží či nesrovnalostí v odezvě systému, pokud nastanou. Po kondicionaci kolony tedy neváhejte a proveďte slepý nástřik. Můžete využít váš standardní teplotní program, nebo třeba následující. Začněte na 40 až 50 °C s gradientem 10 až 20 °C/min až na jakoukoliv nejvyšší limitní teplotu platnou pro vaši metodu, například 300 °C, a tuto teplotu držte po 10 až 15 minut. Chromatogram pozadí si následně uložte pro budoucí porovnání. Jak jsme zmínili dříve, může se vám hodit při hledání příčin nežádoucí odezvy. Na chromatogramu slepého nástřiku by neměly být žádné píky. Případné píky během slepého nástřiku poukazují na problém kontaminace cesty vzorku před kolonou, obvykle tedy v prostoru inletu, nebo dokonce ještě před ním. Jak se kolona s používáním opotřebovává, zvyšuje se míra vzestupu základní linie. Pokud se nárůst základní linie objevuje už při mnohem nižších teplotách, než jste pozorovali při poslední kontrole, velmi pravděpodobně došlo buď ke kontaminaci kolony, nebo dokonce k jejímu poškození, případně ke kontaminaci GC systému.
Pro další informace se obracejte na produktového specialistu Daniela Sandera (daniel.sander@hpst.cz).

GC kolony - instalace a výměna (2. část)

Agilent ePass je neomezené předplatné pro online výuku kdykoli a kdekoli. Umožňuje studentům zlepšit znalosti a dovednosti pro práci se systémy Agilent Technologies pomocí více než 600 hodin školení, které jsou poskytovány ve více než 500 jedinečných kurzech.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_Agilent_Cloud_Labs_pro_pokrocila_skoleni_s_realnymi_daty_2_fd39113ecd/HPST-Agilent-Cloud-Labs-pro-pokrocila-skoleni-s-realnymi-daty-2.jpg" alt="HPST: Agilent Cloud Labs pro pokročilá školení s reálnými daty"/>
<h3>Co vše můžete na školeních získat?</h3>
<ul>
<li>Posunete své dovednosti v oblasti chromatografie, hmotnostní spektrometrie, spektroskopie, přípravě vzorků a další
</li>
<li>Prémiový obsah navržený a připravený speciálně pro systémy Agilent přímo od odborníků z Agilentu
</li>
<li>Neomezené učení dostupné kdykoli a kdekoli: Více než 600 hodin školení vedených odborníky ve více než 500 jedinečných kurzech
</li>
<li>Více než dvacítka výukových linek pro jednotlivé techniky dostupné jako jednotlivé moduly nebo jako navazující celky
</li>
<li>Osvědčené postupy a praktické ukázky s Cloud Labs. Tato inovativní online školení zahrnují laboratorní cvičení, která spouštějí analýzu dat ve vašem prohlížeči a posilují koncepty aplikovaným učením
</li>
<li>Agilent ePass je k dispozici jako 3-měsíční nebo 12-měsíční předplatné
</li>
<li>Předplatné se účtuje předem jednorázovou platbou pro přístup k obsahu po zvolené časové období. Žádné měsíční vyúčtování a žádné automatické obnovování.
</li>
<li>Online kurzy jsou primárně poskytovány v angličtině
</li>
</ul>
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_Agilent_Cloud_Labs_pro_pokrocila_skoleni_s_realnymi_daty_f6f858dd81/HPST-Agilent-Cloud-Labs-pro-pokrocila-skoleni-s-realnymi-daty.jpg" alt="HPST - Agilent Cloud Labs pro pokročilá školení s reálnými daty.jpg"/>
<h3>Varianty předplatného</h3>
<ul>
<li>3 měsíce (obj. číslo R5002A)</li>
<li>12 měsíců (obj. číslo R5003A)</li>
</ul>
Po objednání obdržíte internetový odkaz a přihlašovací údaje, které Vám zajistí přístup ke kompletním studijním materiálům po časově omezenou dobu podle zvolené varianty.
<blockquote>
Pro více informací nás kontaktujte na servis@hpst.cz
</blockquote>
<h3>Výukové linky v angličtině</h3>
<ul>
<li>OpenLab CDS Client/Server Pre-Installation Assistance</li>
<li>Sample Preparation Methods</li>
<li>Getting Started with Your New Agilent GC System</li>
<li>Agilent 7890 Series GC with OpenLAB CDS</li>
<li>Agilent 7890 Series GC with OpenLAB CDS ChemStation Edition</li>
<li>Agilent 8860 GC with OpenLAB CDS</li>
<li>Agilent 8860 GC with OpenLAB CDS ChemStation Edition</li>
<li>Agilent 8890 GC with OpenLAB CDS</li>
<li>Agilent 8890 GC with OpenLAB CDS ChemStation Edition</li>
<li>Agilent Intuvo 9000 GC with OpenLAB CDS</li>
<li>Agilent Intuvo 9000 GC with OpenLAB CDS ChemStation Edition</li>
<li>Agilent Cary 3500 UV-Vis Spectrophotometer with UV Workstation Software</li>
<li>Agilent 5000 Series ICP-OES with ICP Expert</li>
<li>Agilent 7800/7850/7900 ICP-MS with MassHunter</li>
<li>Agilent 8900 Triple Quadrupole ICP-MS with MassHunter</li>
<li>Agilent 5977 GC/MSD with OpenLab CDS</li>
<li>Agilent 5977 GC/MSD with MassHunter Workstation</li>
<li>Agilent 7000 or 7010 Triple Quadrupole GC/MS with MassHunter Workstation</li>
<li>Agilent 1260 Infinity LC Systems with OpenLab CDS</li>
<li>Agilent 1260 Infinity LC Systems with OpenLAB CDS ChemStation Edition</li>
<li>Agilent 1290 Infinity LC Systems with OpenLAB CDS ChemStation Edition</li>
<li>Agilent Dissolution Systems – From Instrument Set-up to Method Transfer</li>
<li>Agilent Clinical Research LC/MS</li>
<li>Agilent Single Quadrupole LC/MSD with OpenLab CDS</li>
<li>Agilent 6400 Series Triple Quadrupole LC/MS with MassHunter Workstation</li>
<li>Agilent Ultivo Triple Quadrupole LC/MS with MassHunter Workstation</li>
<li>Agilent Quadrupole Time of Flight LC/MS with MassHunter Workstation</li>
</ul>
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_Agilent_University_e_Pass_Vice_nez_dvacitka_vyukovych_linek_315fb306b6/HPST-Agilent-University-ePass-Vice-nez-dvacitka-vyukovych-linek.jpg" alt="HPST: Agilent University ePass - Více než dvacítka výukových linek"/>
<h3>Ukázka linky/školení Agilent 8890 GC s OpenLab CDS</h3>
Stali jste se nedávno operátorem plynového chromatografu Agilent 8890? Potřebujete rozšířit své současné znalosti o tom, jak provozovat, zpracovávat data nebo udržovat a odstraňovat problémy s vaším GC Agilent 8890? Pak se podívejte na online moduly dostupné níže, najděte sekci, která odpovídá vašim potřebám, a kliknutím na název kurzu získáte další informace.
<h5>1. GC Techniky</h5>
Rozšiřte své znalosti teorie GC a aplikujte prezentované koncepty ke zlepšení svých dovedností ve vývoji metod a optimalizaci.
<ul>
<li>Fundamentals of Gas Chromatography Video Series</li>
<li>Getting Prepared for Your New GC System</li>
<li>Gas Management Best Practices</li>
<li>GC Inlets Theory and Operation</li>
<li>GC Detectors Theory and Operation</li>
<li>Rules of the Road: What to Consider When Developing a GC Method</li>
<li>Practical Steps in GC Troubleshooting</li>
<li>Understanding How GC Temperature Programming Works</li>
<li>Installation Care and Maintenance of Capillary GC Columns</li>
<li>An Overview of the Agilent J&amp;W Column Portfolio</li>
<li>Agilent Packed GC Columns</li>
</ul>
<h5>2. GC Autosamplery a příprava vzorků</h5>
Zvyšte svou produktivitu efektivním provozem a údržbou GC autosamplerů.
<ul>
<li>Agilent 7693A ALS Basic and Advanced Operation and Maintenance</li>
<li>Agilent 8697 Headspace Sampler Operation and Maintenance</li>
<li>Agilent 7697A Headspace Sampler Operation and Maintenance</li>
<li>Agilent 7697A Headspace Sampler Pneumatics Overview</li>
<li>How to Run the Agilent 7697A Headspace Sampler Restriction and Leak Tests</li>
<li>Carrier Gas Flow Through TD-100E</li>
<li>Tube and Sorbent Selection for Thermal Desorption</li>
<li>Setting up Thermal Desorption Method Parameters</li>
<li>Agilent 7696A Sample Prep WorkBench Operation</li>
</ul>
<h5>3. Obsluha a provoz - Obecné</h5>
Tyto bezplatné kurzy jsou také dodávány s vaším chromatografem a jsou zde zobrazeny pro přehled také.
<ul>
<li>Agilent 8890 Gas Chromatograph e-Introduction</li>
<li>Agilent OpenLab CDS eFamiliarization (2.6)</li>
</ul>
<h5>4. Obsluha a provoz – sběr dat</h5>
Získávání vysoce kvalitních dat je pro správnou laboratorní praxi prvořadé. Tyto moduly vám pomohou porozumět parametrům GC akvizice a používat OpenLab CDS k získávání, zpracování a reportování vzorových dat.
<ul>
<li>Introduction to the Operation of Agilent GC&#39;s with OpenLab CDS (Ver. 2.5)</li>
<li>Use OpenLab CDS to Setup a GC Method (Ver. 2.5)</li>
<li>Introduction to Sequences - A Way to Improve Throughput with OpenLab CDS (Ver. 2.5)</li>
<li>Advanced Sequence Concepts with OpenLab CDS (Ver. 2.5)</li>
<li>Basic Automation and GC Resource Conservation with OpenLab CDS (Ver. 2.5)</li>
<li>Using the RTL Wizard with OpenLab CDS (Ver. 2.5)</li>
</ul>
<h5>5. Obsluha a provoz - Analýza dat</h5>
Aplikujte nástroje pro analýzu dat, které máte v OpenLab CDS pro bezproblémové zpracování vašich dat k dispozici.
<ul>
<li>Basic GC Data Review Using OpenLab CDS Data Analysis (Ver.2.5)</li>
<li>Basic Integration of GC Data Using OpenLab CDS Data Analysis (Ver. 2.5)</li>
<li>Agilent GC OpenLab CDS Quantification with Cloud Laboratory (Version 2.5)</li>
<li>Process GC Quantitative Data Using OpenLab CDS (Ver. 2.5)</li>
<li>Use the Peak Explorer to Review GC Data in OpenLab CDS (Ver. 2.5)</li>
</ul>
<h5>6. Obsluha a provoz - Reporting</h5>
Výstup a publikování výsledků ve formátu, který si přejete, je důležitou součástí pracovního postupu. Moduly v této části popisují, jak generovat a provádět základní přizpůsobení reportovacích sestav.
<ul>
<li>Generating Reports for GC Data in OpenLab CDS (Ver. 2.5)</li>
</ul>
<h5>7. Údržba a odstraňování problémů – obecně</h5>
Bez ohledu na to, jaký máte plynový chromatograf, mohou nastávat určité typické problémy. Moduly v této části řeší některé z nejběžnějších problémů a poskytují jejich hloubková řešení.
<ul>
<li>Making Productivity Happen: an Agilent GC eLearning Series</li>
<li>Agilent 8890 GC Maintenance and Troubleshooting</li>
</ul>
<h5>8. Optimalizace metod</h5>
Prozkoumejte různé způsoby optimalizace vaší metody.
<ul>
<li>Factors to Consider When Optimizing Your Method</li>
<li>Advanced Operation of the Multimode Inlet (MMI)</li>
<li>GC Calculators: An Introduction</li>
</ul>

Agilent University ePass - Neomezený přístup k online kurzům (GC & GC/MS)

<ul>
<li>&quot;Všechno bylo v pořádku... a pak se stalo tohle&quot;
</li>
<li>&quot;Jak mám vyřešit problém?&quot;
</li>
</ul>
<blockquote>
<ul>
<li>Webinář: <a href="https://gcms.cz/webinar/2552">Řešení problémů v plynové chromatografii (Troubleshooting)</a></li>
<li>Přednáška: <a href="https://gcms.cz/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/take_the_trouble_out_of_troubleshooting_june202023_ed892d1493/take-the-trouble-out-of-troubleshooting-june202023.pdf">Řešení problémů v plynové chromatografii (Troubleshooting)</a></li>
</ul>
</blockquote>
<h5>Mějte přehled o tom co děláte/vedete si deník:</h5>
<ul>
<li>Výměna kolony, lineru, septa nebo stříkačky</li>
<li>Nástřik vzorků nebo použití jiné metody</li>
<li>Prováděli údržbu, řezali kolonu nebo propláchovali inlet</li>
</ul>
Logika = Něco se změnilo (pomalu nebo náhle) = Něco je jinak
<blockquote>
<ul>
<li>Článek: <a href="https://gcms.cz/article/972">Údržba Vašeho GC. Chvostující píky.</a></li>
<li>Článek: <a href="https://gcms.cz/article/1267">Údržba Vašeho GC. Chvostující píky (2. část)</a></li>
</ul>
</blockquote>
<h3>Logické řešení problémů</h3>
<h5>Odstraňování problémů začíná izolací problému.</h5>
Existuje pět základních oblastí, kde mohou problémy vznikat:
<ul>
<li>Nástřik</li>
<li>Průtok</li>
<li>Kolona</li>
<li>Detektor</li>
<li>Elektronika Nebo...</li>
<li>Kombinace všech těchto možností</li>
</ul>
Vědět, co daný příznak může a nemůže způsobit je klíčové... a hlavně nepanikařit.
<blockquote>
Článek: <a href="https://gcms.cz/article/873">Údržba Vašeho GC - série videí od Agilent Technologies</a>
</blockquote>
<h3>Nejběžnější problémy s tvarem píků</h3>
<ul>
<li>Chvostování píků - průtokové cesty nebo aktivní místa</li>
<li>Bonusové píky - ve vzorku nebo ve zpětném proplachu (carryover)</li>
<li>Rozdělené píky - problémy s nástřikem, rozpouštědlo</li>
<li>Žádné píky - vzorek nebyl nasříknut, nebyl detekován</li>
<li>Změny odezvy - aktivita, diskriminace v inletu, problém s detektorem</li>
<li>Frontování píků - moc velký násřik nebo problémy v rozpustnosti, problémy s nástřikem</li>
<li>Posun retenčních časů - netěsnosti, stárnutí kolony, kontaminace nebo poškození</li>
<li>Ztráta rozlišení - pokles separační účinnosti, rozšiřování píků</li>
<li>Narušení základní linie - krvácení kolony, kontaminace, problémy s elektronikou</li>
<li>Šum nebo píky v základní linii - elektronika nebo kontaminovaný detektor</li>
<li>Problémy s kvantifikací - problémy s aktivitou, nástřikem nebo detektorem</li>
<li>Ostatní</li>
</ul>
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Altium_Co_neni_zpusobeno_kolonou_e069a89164/Altium-Co-neni-zpusobeno-kolonou.jpg" alt="Altium: Co není způsobeno kolonou"/>
<blockquote>
<ul>
<li>Článek: <a href="https://gcms.cz/article/854">TEORIE, PRAXE A ÚDRŽBA: GC – Plynová chromatografie – základy a principy</a></li>
</ul>
</blockquote>
<h3>Techniky řešení problémů</h3>
<ul>
<li>Profil krvácení (bez nástřiku): problémy základní linie</li>
<li>Násřik píku bez retence: problémy s tvarem píku</li>
<li>Testovací směs: všechny problémy</li>
<li>Izolovat jednotlivé části: všechny problémy</li>
<li>Condensation test: základní problémy</li>
<li>Jumper tube test:í: základní problémy</li>
</ul>
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Altium_Testovaci_smes_vyrobte_si_vlastni_addaec9b6e/Altium-Testovaci-smes-vyrobte-si-vlastni.jpg" alt="Altium: Testovací směs - vyrobte si vlastní"/>
<h3>Nezapomeňte, že</h3>
Kompletní systém = nosný plyn + injektor + kolona + detektor + software
<ul>
<li>Neměňte příliš mnoho částí a proměnných najednou</li>
<li>Vícenásobné příčiny a efekty</li>
</ul>
<blockquote>
<ul>
<li>Článek: <a href="https://gcms.cz/article/1563">GC kolony - instalace a výměna (1. část)</a></li>
<li>Článek: <a href="https://gcms.cz/article/1715">GC kolony - instalace a výměna (2. část)</a></li>
</ul>
</blockquote>
<h3>Přehled vybrané literatury na téma řešení problémů v GC a GC/MS od Agilent Technologies <a href="https://gcms.cz/library?mainauthorItems=10&amp;search=troubleshooting">v knihovně LabRulezGCMS</a></h3>
<ul>
<li>GC Troubleshooting (Technické články | 2022)
</li>
<li>GC Intelligence: User-Guided Troubleshooting (Technické články | 2022)
</li>
<li>GC Troubleshooting Guide (Příručky | 2019)
</li>
<li>GC separation troubleshooting (Prezentace | 2023)
</li>
<li>Ion Pump Troubleshooting (Technické články | 2023)
</li>
<li>Troubleshooting GC Capillary Columns (Prezentace | 2011)
</li>
<li>General GC Column Troubleshooting (Prezentace | 2021)
</li>
<li>Practical Steps in GC Troubleshooting (Prezentace | 2017)
</li>
<li>GC Troubleshooting Series: Column Installation (Technické články | 2009)
</li>
<li>GC Troubleshooting Series: Leak Check (Technické články | 2009)
</li>
<li>Lost and Found: Troubleshooting Missing Peaks in GC Analysis (Prezentace | 2022)
</li>
<li>Put Your Smart GC to Work - Enable remote connectivity and take the guesswork out of GC Maintenance (Prezentace | 2018)
</li>
<li>GC Troubleshooting in the Palm of Your Hand (Brožury a specifikace | 2022)
</li>
</ul>
<h3>Přehled vybraných webinářů na téma řešení problémů v GC a GC/MS</h3>
<h5>1. <a href="https://gcms.cz/webinar/1486">Lost and Found: Troubleshooting Missing Peaks in GC Analysis</a></h5>
Připojte se k nám a my vám poskytneme několik postřehů a strategií, jak na troubleshooting v případě chybějících píků. 
<h5>2. <a href="https://gcms.cz/webinar/1092">How to Troubleshoot and Improve your GC/MS like an Agilent Scientist</a></h5>
V tomto webináři se budeme zabývat GC/MS problémy očima aplikačních inženýrů společnosti Agilent a uvedeme příklady, se kterými máme zkušenosti a které jsme řešili. 
<h5>3. <a href="https://gcms.cz/webinar/972">How to clean an Agilent GCMS Ion Source: A comprehensive guide</a></h5>
K výuce údržby GCMS iontových zdrojů Agilent budou použity slidy, komentáře a video ukázky. 
<h5>4. <a href="https://www.agilent.com/en/training-events/eseminars/gc-gc-ms-webinars">Get Your Peaks into Shape: General GC Column Troubleshooting</a></h5>
Na tomto webináři probereme některé z nejčastějších chromatografických problémů, se kterými se setkáte v plynové chromatografii, a použijeme logický přístup k nalezení hlavní příčiny a odstranění problému. 
<h5>5. <a href="https://gcms.cz/webinar/105">It’s Peak Season for Great Peak Shape: Tips and Tricks on Troubleshooting GC Chromatography</a></h5>
V tomto webináři se podíváme na nejčastější problémy, se kterými se můžeme setkat v plynové chromatografii a logickým přístupem nalezneme jejich hlavní příčiny a odstraníme je.
<h5>6. <a href="https://gcms.cz/webinar/515">Getting your LC/GC Lab Up and Running Again</a></h5>
Separation Science ve spolupráci s Agilentem nabízí připravovaný webinář popisující, jak rychle a bezpečně obnovit provoz vašich LC a GC instrumentů.
<h5>7. <a href="https://gcms.cz/webinar/1844">A Standard Workflow and Troubleshooting Process to Troubleshoot the GC Flow Path and Column Performance</a></h5>
Co tvoří dobrý testovací mix kontroly kvality, jaké data (testovací mix) kontrolovat, kroky k udržení kvality dat a co dělat, když kvalita dat klesá nebo nesplňuje pokyny zákazníka pro kontrolu kvality.
<h5>8. <a href="https://gcms.cz/webinar/2555">Tips and Tricks: Best Practices for Column Installation and Care of GC Columns</a></h5>
Ať už jste v praxi plynové chromatografie nováčci nebo byste si chtěli osvěžit informace, připojte se k nám, probereme správnou instalaci kolony a manipulaci se všemi GC Agilent.

Řešení problémů v plynové chromatografii (Troubleshooting)

<div><div><div>Aplikační specialisté Agilent Technologies připravili pro uživatele plynové chromatografie souhrnný dokument, ve kterém najdete jak základní obecné znalosti, tak i informace o vývoji metod a jejich optimalizaci.Dále v dokumentu najdete informace o údržbě přístrojů a o tom, jak řešit typické chromatografické problémy, jako jsou tvar píku, malé rozlišení, zvýšená hladina signal-to-noise, negativní píky, štěpení píku a mnoho dalších.Dokument je výborně strukturovaný a provázaný odkazy, což zlepšuje přehlednost a orientaci.&nbsp;<blockquote>Ebook ke stažení <a target="_blank" rel="noopener noreferrer" href="https://www.agilent.com/cs/library/brochures/ebook-gcms-faq-5994-7643en-agilent.pdf">ZDE</a></blockquote><figure class="image"><img style="aspect-ratio:1790/841;" src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/Altium_International_GC_a_GCMS_e_Book_Okamzity_pristup_k_informacim_ktere_potrebujete_984154945e.jpg" alt="Altium International: GC a GC/MS eBook - Okamžitý přístup k informacím, které potřebujete!" srcset="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/thumbnail_Altium_International_GC_a_GCMS_e_Book_Okamzity_pristup_k_informacim_ktere_potrebujete_984154945e.jpg 245w," sizes="100vw" width="1790" height="841"></figure><h3>Výběr literatury od Agilent Technologies zaměřené na <a target="_blank" rel="noopener noreferrer" href="https://gcms.cz/library?mainauthorItems=10&amp;search=Troubleshooting">řešení problému v GC s GC/MS v knihovně LabRulezGCMS</a></h3><ul><li>GC Troubleshooting (Technické články | 2022)</li><li>GC Intelligence: User-Guided Troubleshooting (Technické články | 2022)</li><li>GC separation troubleshooting (Prezentace | 2023)</li><li>Ion Pump Troubleshooting (Technické články | 2023)</li><li>GC Troubleshooting Guide (Příručky | 2019)</li><li>GC and GC/MS Frequently Asked Questions (Příručky | 2024)</li><li>Introduction to Troubleshooting and Preventive Maintenance for the Agilent 5973 GC-MSD System (Ostatní | 2000)</li><li>General GC Column Troubleshooting (Prezentace | 2021)</li><li>Troubleshooting GC Capillary Columns (Prezentace | 2011)</li><li>GC Troubleshooting: Fronting Peaks (Technické články | 2009)</li><li>GC Troubleshooting: Split Peaks (Technické články | 2009)</li><li>Introduction to Troubleshooting and Preventive Maintenance for the 5972 GC-MSD System (Ostatní | 2000)</li><li>Practical Steps in GC Troubleshooting (Prezentace | 2017)</li><li>GC Troubleshooting Series: Column Installation (Technické články | 2009)</li><li>GC Troubleshooting Series: Leak Check (Technické články | 2009)</li><li>GC Troubleshooting: Establishing a Maintenance Method (Technické články | 2009)</li><li>GC Troubleshooting: Retention Time Shifts (Technické články | 2009)</li><li>Lost and Found: Troubleshooting Missing Peaks in GC Analysis (Prezentace | 2022)</li><li>A Standard Workflow and Troubleshooting Process to Maintain and Troubleshoot the Flow Paths of the Agilent Intuvo GC and Conventional GCs (Aplikace | 2023)</li><li>Put Your Smart GC to Work - Enable remote connectivity and take the guesswork out of GC Maintenance (Prezentace | 2018)</li><li>GC Troubleshooting in the Palm of Your Hand (Brožury a specifikace | 2022)</li><li>Fundamentals and Troubleshooting of the Split/Splitless Inlet (Prezentace | 2020)</li><li>GC Troubleshooting: Changes in Peak Size (Technické články | 2009)</li><li>Troubleshooting Guide for Markes UNITY1/UNITY2 (Příručky)</li><li>Maintenance and Troubleshooting of Oil Diffusion Pumps (Manuály)</li><li>Don’t Fear the Ghost or Unexpected Peaks: Troubleshooting and Prevention (Prezentace | 2019)</li><li>Don’t Fear the Ghost or Unexpected Peaks: Troubleshooting and Prevention (Prezentace | 2019)</li><li>Agilent MassHunter Workstation Software Troubleshooting Guide (Manuály | 2011)</li><li>Agilent GC-TQ 7000 Troubleshooting Reference (Manuály | 2011)</li><li>GC Troubleshooting Series: Replace Gold Seal (Technické články | 2009)</li><li>Troubleshooting Tips &amp; Tricks for your GC Analyzer &amp; CFT Application (Prezentace | 2014)</li><li>Tips, Tricks, and Troubleshooting for Successful Headspace Analysis (Prezentace | 2024)</li><li>Practical Steps in GC Troubleshooting Techniques, Tips, and Tricks (Prezentace | 2017)</li><li>Take the Trouble Out of Troubleshooting - Gas chromatography (Prezentace | 2023)</li><li>A Tale of Two Peaks: Troubleshooting Poor Peak Shape (Prezentace | 2019)</li><li>GC Troubleshooting Series Part One: Ghost Peaks (Technické články | 2009)</li><li>GC Troubleshooting Series Part Two: Baseline Disturbances (Technické články &nbsp;| 2009)</li><li>GC Troubleshooting - Demo: Replace Liner, Septum, O-Ring (Technické články | 2009)</li><li>GC Troubleshooting Series Part Four: Tailing Peaks (Technické články | 2009)</li><li>GC Troubleshooting: Replace the Split Vent Trap (Technické články | 2009)</li><li>GC Troubleshooting: Loss of Resolution Over Time (Technické články | 2009)</li><li>Agilent 5973 GC-MSD Troubleshooting and Maintenance (Ostatní | 2000)</li><li>Tips for Developing Successful Solid Phase Extraction Methods (Prezentace | 2022)</li><li>An Agilent Guide to SPME Analysis (Prezentace | 2020)</li><li>Sample Cleanup: Method Development for Solid Phase Extraction and Beyond (Prezentace | 2024)</li><li>GC Intelligence: Trend Plotting (Technické články | 2022)</li><li>Troubleshooting 6890/6850 Split/Spitless Inlet Leaks - Cannot achieve Setpoint Pressure (Technické &nbsp;články)</li><li>Agilent CrossLab method and application services (Ostatní | 2020)</li><li>Agilent 8890, 8860, and 9000 GC Browser Interface: A Tutorial (Technické články | 2022)</li><li>It’s Peak Season for Great Peak Shape - Tips and tricks on troubleshooting in GC chromatography (Prezentace | 2020)&nbsp;</li><li>Don’t Get Carried Away by Carryover: Troubleshooting GC Chromatography (Prezentace | 2024)</li><li>Tips and tricks for troubleshooting GC column bleed problems (Prezentace | 2022)</li><li>Simplifying GC Syringes and Sample Introduction (Prezentace | 2020)</li><li>Who Do I Turn To? - Chromatography resources (Prezentace | 2021)</li><li>Eliminating the Fear Factor - Flame Ionization Detector (Rrezentace | 2020)</li></ul></div></div></div>

GC a GC/MS eBook - Okamžitý přístup k informacím, které potřebujete!

<h3>Dělení v čase</h3>
Plynová chromatografie (GC) je jednou ze separačních technik, stejně jako destilace a podobně. Na rozdíl od nich, se ale zpravidla nevyužívá k fyzickému oddělení jednotlivých složek, ale slouží k separaci složek v čase.
Toho je docíleno tím, že odpařená směs (nebo směs plynů) je vedena do trubice (kolony) obsahující materiál (stacionární fázi), který zadržuje některé složky více než jiné. Dochází tak k oddělení složek v čase. Detekcí na výstupu je získán chromatogram (viz Obrázek 1), ve kterém každý pík reprezentuje jinou složku původní směsi.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_Obrazek_1_Typicky_chromatogram_9d476e4c90/HPST-Obrazek-1-Typicky-chromatogram.jpg" alt="HPST: Obrázek 1 Typický chromatogram"/>
Každý chromatografický pík charakterizuje jeho retenční čas a velikost (výška nebo plocha).
<ul>
<li>Retenční čas je specifický pro různé látky a využívá se proto při identifikaci jednotlivých složek</li>
<li>Velikost píku potom odpovídá množství dané látky a dá se použít při kvantifikaci</li>
</ul>
<h3>Části chromatografického systému</h3>
Sestava pro plynovou chromatografii obsahuje:
<ul>
<li>Regulovaný zdroj čistého plynu (<a href="https://gcms.cz/library?mainauthorItems=10&amp;search=carrier+gas">nosný plyn</a>), který tlačí vzorek skrz plynový chromatograf</li>
<li><a href="https://gcms.cz/library?mainauthorItems=10&amp;search=inlet">Inlet</a>, kterým se dávkuje a ve kterém také dochází ke zplynění kapalných vzorků</li>
<li><a href="https://gcms.cz/library?instrumentationItems=19&amp;mainauthorItems=10&amp;search=column">Kolonu</a>, na které dochází k chromatografické separaci</li>
<li>Detektor, který reaguje na přítomnost látek na výstupu z kolony a odezvu převádí na elektrický signál</li>
<li>Řídící počítač a <a href="https://gcms.cz/products?category=8&amp;distributorItems=37&amp;manufacturerItems=10">software</a> pro sběr a vyhodnocení dat.</li>
</ul>
Schématicky je systém znázorněn na Obrázku 2.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_Obrazek_2_Chromatograficky_system_d328498962/HPST-Obrazek-2-Chromatograficky-system.jpg" alt="HPST: Obrázek 2 Chromatografický systém"/>
<h5>Nosný plyn</h5>
V plynové chromatografii se využívá plyn jako základní médium, které unáší vzorek z inletu přes kolonu do detektoru. Nejčastěji se pro tyto účely používá:
<ul>
<li><a href="https://gcms.cz/library?mainauthorItems=10&amp;search=Helium+carrier+gas">helium</a></li>
<li><a href="https://gcms.cz/library?mainauthorItems=10&amp;search=Nitrogen+carrier+gas">dusík</a></li>
<li><a href="https://gcms.cz/library?mainauthorItems=10&amp;search=Hydrogen+carrier+gas">vodík</a></li>
<li>případně argon</li>
</ul>
Nosný plyn musí být čistý. I malá koncentrace nečistot může nežádoucím způsobem reagovat se vzorkem nebo kolonou. V praxi se to projeví například výskytem falešných píků, sníženou citlivostí nebo zvýšením šumu detektoru. V krajním případě může dojít i k nevratnému poškození přístroje. Proto je potřeba <a href="https://gcms.cz/products?category=97">používat plyny s vysokou čistotou</a>. Případně lze systém vybavit sorpčními trapy zachycujícími vlhkost, uhlovodíky a kyslík.
Typické zapojení je uvedeno na Obrázku 4.
V praxi se často používají kombinované trapy, které obsahují všechny tři sorbenty. U nich je vždy vyznačeno, jakým směrem se mají zapojit. Pokud jsou plyny přivedeny z centrálního rozvodu, je doporučeno umístit čisticí trapy co nejblíže k přístroji.
<blockquote>
<h4>17 edukativních GC webinářů Agilent Technologies zaměřených na základy a principy <a href="https://gcms.cz/webinars?search=agilent&amp;tags=36-1">v databázi LabRulezGCMS</a></h4>
</blockquote>
<blockquote>
<h5>Lab Productivity Series – GC Basic</h5>
</blockquote>
<blockquote>
<ul>
<li>Kritické části GC</li>
<li>Různé typy nástřiku a detektorů</li>
<li>Význam různých parametrů pro výběr GC kolon</li>
<li>Co je plynová chromatografie a typický chromatogram?</li>
<li>Techniky zavádění vzorků</li>
<li>Porovnání typů detektorů a jejich selektivity</li>
<li>Digitální možnosti zákaznické podpory na dálku</li>
</ul>
</blockquote>
<blockquote>
<h5>Lab Productivity Series – GC Advanced</h5>
</blockquote>
<blockquote>
<ul>
<li>Uživatelské odstraňování problémů a údržba GC</li>
<li>Tipy a triky pro zlepšení GC chromatografie</li>
<li>Úvahy o vzorku a jeho dávkování, které je třeba mít na paměti při vývoji GC metody</li>
<li>Selektivita kolon pro robustní metodu</li>
<li>Nosný plyn v GC</li>
<li>Vývoj teplotního programu a optimalizace metod</li>
<li>Řešení Agilent cross Lab pro celou Vaší firmu</li>
</ul>
</blockquote>
K nastavení tlaku nosného plynu je potřeba použít kvalitní dvoustupňový redukční ventil s kovovou membránou. Dvoustupňová regulace nejprve sníží tlak z lahve (až 350 bar) na zhruba 50 bar a následně ve druhém stupni dochází k poklesu tlaku na nastavenou hodnotu. Tímto mechanismem je zajištěna velice přesná a stabilní regulace výstupního tlaku. Oproti tomu jednostupňové regulační ventily snižují tlak z lahve přímo na nastavenou hodnotu. Vzhledem k velkému tlakovému spádu je taková regulace méně přesná, což může vést ke zvlnění základní linie detektoru a posunům retenčních časů.
Levné redukční ventily jsou zpravidla vybavené gumovou membránou, skrz kterou může difundovat kyslík a další nečistoty z okolí. Dramaticky se tím snižuje kvalita nosného plynu. Pro účely plynové chromatografie jsou takové ventily naprosto nevhodné.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_Obrazek_4_Zdroj_nosneho_plynu_742a5f939a/HPST-Obrazek-4-Zdroj-nosneho-plynu.jpg" alt="HPST: Obrázek 4 Zdroj nosného plynu"/>
<h5>Inlet</h5>
Inlet je část plynového chromatografu, která slouží k přenesení zplyněného vzorku do proudu nosného plynu. Nejčastěji se k tomuto účelu používá nástřikový port případně dávkovací ventil.
<a href="https://gcms.cz/library?instrumentationItems=1&amp;mainauthorItems=10&amp;search=valves">Dávkovací ventily</a> využívají dávkovací smyčku, která se nejprve naplní vzorkem a následně se po přepnutí ventilu celý obsah vypláchne na kolonu. Pomocí ventilů lze dávkovat jak plyny, tak i kapaliny.
Nástřikovým portem můžeme přes septum pomocí stříkačky dávkovat plynné i kapalné vzorky. Za účelem rychlého zplynění je inlet zpravidla vyhříván. Základní princip dávkování je uveden na Obrázku 3. S různými technikami nástřiku a s tím spojeným technickým řešením se blíže seznámíme příště.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_Obrazek_3_Schema_nastrikoveho_portu_a4b2d3a34b/HPST-Obrazek-3-Schema-nastrikoveho-portu.jpg" alt="HPST: Obrázek 3 Schéma nástřikového portu"/>
Všechny inlety však mají jedno společné. Abychom získali kvalitní výsledky je potřeba zajistit těsnost a čistotu nástřikového portu. V případě netěsnosti bude vzorek unikat ze systému a měření nebude opakovatelné. Navíc se skrz opotřebené septum nebo špatnou feruli do přístroje snadno dostane kyslík, který jsme složitě eliminovali pomocí kvalitních redukčních ventilů a čisticích trapů.
<h5>Kolona</h5>
Na chromatografické koloně dochází k separaci jednotlivých složek. Uživatelsky je možné do přístroje namontovat různé typy kolon a přístroj tak využít pro různé typy analýz.
Vzhledem k tomu, že dělení složek silně závisí na teplotě, jsou kolony instalovány v horkovzdušné peci s přesně regulovanou teplotou, viz Obrázek 5.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_Obrazek_5_Kolona_v_peci_plynoveho_chromatografu_3abe3ee8fc/HPST-Obrazek-5-Kolona-v-peci-plynoveho-chromatografu.jpg" alt="HPST: Obrázek 5 Kolona v peci plynového chromatografu"/>
Nyní jen předesílám, že zejména za vyšších teplot dochází u řady kolon k nevratné degeneraci, která může být umocněna přítomností kyslíku a vody. Proto je potřeba, aby byla kolona pod stálým průtokem čistého nosného plynu.
<h5>Detektor</h5>
Proud nosného plynu, který obsahuje oddělené látky, je z kolony veden do detektoru. Existuje celá řada detektorů, které se vzájemně liší konstrukcí a principy na kterých fungují. Základní funkce je ale u všech stejná:
<ul>
<li>Pokud detektorem prochází čistý nosný plyn, je generován stabilní elektrický signál – základní linie.</li>
<li>Při průchodu sledovaných látek se elektrický signál změní – zaznamená se chromatografický pík.</li>
</ul>
Obecně je však potřeba mít napaměti, že většina detektorů obsahuje části ohřáté na vysokou teplotu. Pokud se za těchto podmínek dostanou do kontatku s kyslíkem, dochází k oxidaci jejich povrchu, což může vést k jejich poškození nebo trvalé změně vlastností. Proto je potřeba, aby byly během provozu detektory neustále promývány čistými provozními plyny.
<h3>Závěr</h3>
V úvodním dílu seriálu o plynové chromatografii jsme se seznámily se základními částmi chromatografického systému a ukázali si, jaký význam má čistota provozních plynů. 
Příště si povíme více o technikách nástřiku vzorku, představíme si faktory, které nástřik zásadním způsobem ovlivňují a seznámíme se s různými typy inletů. Pokud nechcete čekat na další článek, můžete se přihlásit na naše odborné semináře, kde se o plynové chromatografii dozvíte víc.
<ul>
<li><a href="https://gcms.cz/products/114">HPST GC školení - uživatelské dovednosti a diagnostika</a></li>
<li><a href="https://gcms.cz/products/115">HPST MS (single-quad/QQQ pro GC) školení - uživatelské dovednosti a diagnostika</a></li>
</ul>
<h3>Přehled literatury k základům a principům v plynové chromatografii od Agilent Technologies (<a href="https://gcms.cz/library?search=fundamentals&amp;mainauthorItems=10">ke stažení v knihovně LabRulezGCMS</a>)</h3>
<ul>
<li>Fundamentals of Gas Chromatography (Příručky | 2002)
</li>
<li>Mass Spectrometry Fundamentals –Theory (Prezentace | 2016)
</li>
<li>Fundamentals of Gas Chromatography: Theory and Hardware, Mass Spectrometry Fundamentals –Theory and Hardware (Prezentace | 2020)
</li>
<li>Fundamentals and Troubleshootingof the Split/Splitless Inlet (Prezentace | 2020)
</li>
<li>GC/MS Fundamentals: What are GC/SQ, TQ, and Q-TOF and When to Use Them? (Prezentace | 2019)
</li>
<li>Time-of-Flight Mass Spectrometry (Aplikace | 2004)
</li>
<li>Single Quad, Tandem Quad and QTOF Mass Spectrometers: What is Used and When? (Prezentace | 2019)
</li>
<li>GC Tips and Tricks - Your guide to integrated, intuitive GC intelligence (Příručky | 2022)
</li>
<li>Time-of-Flight Mass Spectrometry (Aplikace | 2004)
</li>
<li>Single Quad, Tandem Quad and QTOF Mass Spectrometers: What is Used and When? (Prezentace | 2019)
</li>
</ul>

TEORIE, PRAXE A ÚDRŽBA: GC – Plynová chromatografie – základy a principy

Webináře

Aplikace

Akademie

Osobnosti

Plasty

Životní prostředí

Potraviny

Vody

Zdraví

Přednáška

Vědecký článek

Rozhovor

Toxikologie

Popularizace

Věda a výzkum

Software

Covid-19

Kariéra

Článek

Laboratoře

Různé

Produkt

Video

Poster

Nejbližší akce

Typ novinky

Zaměření

Je autorizovaným distributorem společnosti Agilent Technologies pro Českou republiku v oblastech chromatografie (GC, HPLC, UHPLC, kapilární elektroforéza) a hmotnostní spektrometrie (GC/MS, LC/MS, CE/MS), disolučních aparátů, molekulární (UV-Vis, UV-Vis-NIR, fluorescence, FTIR analyzátory a mikroskopy) a atomové spektroskopie (ICP-OES, ICP-MS, AAS), a v neposlední řadě také v oblasti molekulární biologie a genomiky (analýza nukleových kyselin a proteinů, microarray skenery a skla, PCR & RT-PCR, qPCR, řešení pro NGS, reagencie pro mutagenezi a klonování, sondy FISH a další).

Altium International

Odběry vzorků 2025

77. Zjazd chemikov 2025

VIII. Setkání uživatelů FTIR a Ramanových spektrometrů BRUKER

Cutting through pesticide residues and heavy metals

From Peaks to Insights: Navigating Environmental Analysis with Weck Laboratories using GC/MS/MS Instrumentation

Amplifying the Invisible: Advanced Spectroelectrochemistry with EC-SERS

GCMS novinky typu akademie | LabRulez GCMS