General Approach to the Extraction of Basic Drugs from Biological Fluids Using ISOLUTE® HCX Mixed-Mode SPE Columns

Význam tématu

Správná extrakce základních léčiv z biologických tekutin je klíčová pro spolehlivou kvantifikaci a detekci stopových látek v klinických i forenzních laboratořích. Využití kombinovaného retenčního mechanismu (iontová výměna + nepolární interakce) na sloupcích ISOLUTE HCX minimalizuje rušivé matrixové efekty a zajišťuje vysokou čistotu extraktu před následnou analýzou GC-MS.

Cíle a přehled článku

Článek popisuje univerzální postup pro izolaci bazických farmak z moči pomocí smíšeně módových SPE sloupců ISOLUTE HCX. Cílem je demonstrovat, jak kombinace kationtové výměny a reverzní fáze zamezí koextrakci nepolárních interferencí a umožní čistý extrakt vhodný pro metody s GC-MS.

Použitá metodika a instrumentace

• Předepracování vzorku: moč 5 mL naředěná 1:1 (v/v) 0,05–0,1 M fosfátovým pufrem pH 6,0.
• SPE kolona: ISOLUTE HCX 130 mg/10 mL (C8 + kationtová výměna).
• Podmínění kolony: metanol 1 mL, poté fosfátový pufr 1 mL.
• Aplikace vzorku: průtok 1–2 mL/min.
• Eluce interferencí: nejprve fosfátový pufr 2 mL, poté 1 M octová kyselina 1 mL, posléze vysušení a proplach metanolem 1 mL.
• Eluce analyzovaných látek: ethylacetát s 5 % amoniaku (v/v), 2 mL.
• Konečná analýza: odpaření eluentu, případná derivatizace pro GC-MS.

Hlavní výsledky a diskuse

• Dvoustupňové eluce významně snížilo obsah nepolárních rušivých látek díky selektivnímu odmytí interferencí před vlastní elucí cílových bazických sloučenin.
• Metoda poskytla reprodukovatelné a vysoké výtěžnosti extrakce, vhodné pro GC-MS stanovení farmak s širokým rozsahem polárních i nepolárních vlastností.
• Optimalizované pH a síla pufru zajistily účinnou ionizaci i retenci bazické funkce během mytí.

Přínosy a praktické využití metody

• Zvýšená selektivita a čistota extraktu vedou k menšímu zatížení GC-MS systému a lepší citlivosti stanovení.
• Postup lze snadno adaptovat pro různé biologické matrice (plasma, sérum) výměnou pufru a objemu vzorku.
• Jednoduché a rychlé provedení vhodné pro rutinní QA/QC laboratoře i forenzní aplikace.

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se úsilí o plnou automatizaci SPE procesů a miniaturizaci protokolů pro vysokoprůtokové screeningové platformy. Další vývoj materiálů smíšené módy a integrace s UHPLC-MS/MS posílí citlivost a rozšíří spektrum analyzovatelných sloučenin.

Závěr

Mixed-mode SPE na bázi ISOLUTE HCX představuje robustní a univerzální řešení pro extrakci bazických léčiv z biologických tekutin. Díky kombinaci iontové výměny a reverzní fáze dochází k efektivnímu odstranění interferencí a k získání vysoce čistých extraktů pro následné GC-MS stanovení.