Sample Preparation by Mixed-Mode SPE Using ISOLUTE® HCX

Význam tématu

Řízená extrakce základních léčiv z biologických vzorků je klíčová pro vysoce citlivou a selektivní analýzu nízkých koncentrací. Tradiční přístupy jako srážení proteinů nebo non-polar SPE často selhávají v potlačení interferencí. Smíšený režim SPE na bázi kombinace iontové výměny a hydrofobních interakcí výrazně zvyšuje čistotu extraktu a stabilitu metody.

Cíle a přehled článku

Článek představuje použití sorbentů ISOLUTE HCX pro extrakci základních léčiv z plazmy nebo moči. Popisuje postup přípravy vzorku, optimalizaci podmínek elučního režimu a dosažené účinnosti separace při minimálním rušení koextrahovanými látkami.

Použitá metodika a instrumentace

Postup zahrnuje následující kroky:

• Podmínění kolonek methanolem a tlumivým roztokem amonného acetátu (0,05 M, pH 6,0).
• Naložení 100 µl biologického vzorku 1:1 ředěného amonným acetátem, aplikace vakua nebo tlaku k řízenému průtoku.
• Odloučení neutrálních a kyselých interferencí elučními kroky s amonným acetátem (0,05 M, pH 6,0), kyselinou octovou (1 M) a methanolem.
• Eluce cílových základních analytů metodou potlačení ionizace 95:5 methanol/amoniak, dvojí aplikace po 100 µl s 2–4minutovým nasákáním.
• Odpaření eluátu a rekonstituce ve vhodném mobilním fázi (např. pro LC-MS).

Klíčová instrumentace:

• Biotage VacMaster-10 nebo VacMaster-96 vakuový manifold
• Biotage PRESSURE+96 pozitivní tlakový manifold
• Automatizovaný systém Biotage Extrahera™

Hlavní výsledky a diskuse

Použití ISOLUTE HCX sorbentů umožňuje robustní retenci analyzovaných látek nezávisle na iontické síle matrice díky počátečním hydrofobním interakcím. Následné potlačení kationtové výměny silně zjednodušuje eluci základních léčiv bez současného uvolnění rušivých komponent. Testy s 25mg kolonkami potvrdily spolehlivou extrakci až z 1 ml plazmy při koncentracích analytu 0,1 mg/ml bez průniku.

Přínosy a praktické využití metody

• Vysoká čistota konečného extraktu s minimem koextrahovaných látek.
• Široké pracovní pH (1–14) a odolnost vůči proměnlivým iontovým podmínkám.
• Kompatibilita s vysokotlakou kapalinovou chromatografií a hmotnostní spektrometrií.
• Snadná adaptace do automatizovaných platforem a 96destičkových formátů.

Budoucí trendy a možnosti využití

Smíšené režimy SPE se budou dále vyvíjet s cílem integrace selektivních chemistrii s měnícími se analytickými potřebami, například pro metabolomiku a proteomiku. Očekává se rozšíření sorbentů se specifickou afinitou k novým třídám molekul a zdokonalení automatizace příprav vzorků v malých objemech.

Závěr

ISOLUTE HCX mixed-mode sorbenty představují efektivní a univerzální nástroj pro extrakci základních léčiv z biologických matic. Díky kombinaci hydrofobních a kationtových interakcí je metoda velmi selektivní, spolehlivá a snadno integrovatelná do rutinní laboratorní praxe.

Reference

Biotage Technical Note TN125.V.1 Sample Preparation by Mixed-Mode SPE Using ISOLUTE HCX, Biotage 2020.