Sample Preparation by Mixed-Mode SPE Using ISOLUTE® HAX

Využití metodiky ISOLUTE HAX pro extrakci kyselých léčiv z biologických vzorků

Význam tématu

Správná příprava vzorků je klíčová pro citlivou a selektivní analýzu nízkých koncentrací ionizovatelných látek v biologických matricích. Konvenční postupy jako vysrážení proteinů nebo nepólové SPE často neposkytují dostatečnou čistotu extraktů. Mixed-mode SPE sorbenty kombinující iontovou výměnu a hydrofobní interakce přinášejí výrazné zlepšení v čistotě a spolehlivosti měření v oblastech klinické farmakologie, toxikologie či QA/QC laboratoří.

Cíle a přehled studie / článku

Technická poznámka popisuje optimalizovaný protokol pro extrakci kyselých léčiv z plazmy a moči pomocí mixed-mode SPE sorbentů ISOLUTE HAX. Cílem je demonstrovat postup, který umožní selektivní retenci analyzovaných látek a současně efektivní odstranění interferencí, včetně endogenních malých organických kyselin a neutrálních nebo zásaditých složek matice.

Použitá metodika a instrumentace

Pro separaci byl použit sorbent ISOLUTE HAX ve formátu 25 mg/1 mL sloupků, tabless sloupků nebo 96-well destiček. Vzorky plazmy či moči se ředily 1:1 acidifikovaným pufrem (2 % kyseliny mravenčí, pH 2). Postup zahrnoval kondicionaci sorbentu methanolem, equilibraci pufrem, načtení vzorku, tři fáze elučních kroků pro odplavení interferencí a konečnou eluci analyzátů s methanolem s kyselinou octovou. Práce probíhala na vakuových modulech VacMaster nebo na pozitivním tlakovém manifoldu Biotage PRESSURE+96 a na automatickém systému ExtraheraTM.

Hlavní výsledky a diskuse

Mixed-mode SPE umožnil selektivní zachycení kyselých a polárně nepólových látek díky kombinaci aniontové výměny a hydrofobních interakcí. Interference byly účinně odstraněny postupným elutím pufrem a směsí metanol-voda. Analytické eluce v prostředí methanol-acetic acid 98:2 v několika krocích zajistily kompletní uvolnění cílových látek. Extrakty vykazují vysokou čistotu a minimální rušící signály v následné LC-MS analýze.

Přínosy a praktické využití metody

• Vysoká selektivita extrakce kyselých léčiv z krevních a močových vzorků
• Výrazné snížení matričních interferencí
• Kompatibilita s automatizovanými dávkovači a vakuovými/ tlakovanými manifoldy
• Možnost zpracování vzorků v destičkovém formátu pro vysokopropustné aplikace

Použitá instrumentace

• ISOLUTE HAX mixed-mode SPE kolony a 96-well destičky, Biotage
• Biotage VacMaster-10/20 vakuový manifold
• Biotage PRESSURE+96 pozitivní tlakový manifold
• Automatický extrakční systém ExtraheraTM

Budoucí trendy a možnosti využití

Očekává se další rozvoj mixed-mode sorbentů s upravitelnými poměry iontových a hydrofobních funkcí. Vznikají miniaturizované a modulární formáty pro mikroextrakce a organické rozpouštědla šetrnější k životnímu prostředí. Integrace do plně automatizovaných linek a kombinace s novými detekčními technikami rozšíří využití v omické a klinické analytice.

Závěr

Metoda mixed-mode SPE s ISOLUTE HAX poskytuje robustní, vysoce selektivní a čisté extrakty kyselých látek z biologických vzorků. Prokazatelně snižuje rušení matice a je snadno implementovatelná v laboratořích s požadavky na vysokou citlivost a propustnost analýz.